食品中空肠弯曲菌检---江苏出入境.ppt

微生物API鉴定系统 C.2 弯曲菌的筛选检测方法 C.2.1 miniVidas用于弯曲菌的初筛，原理为酶联荧光免疫分析 ELFA 方法。对于结果阴性的可以直接判定为阴性，对于结果阳性的需进一步确认，可比传统方法快2天。（具体参照厂家说明） C.2.2 BAX系统原理为利用PCR进行基因检测，用于空肠弯曲菌和大肠弯曲菌的筛选，阳性结果仍需确认。 空肠弯曲菌检测流程 样本制备 增菌 检测 样本 + 选择性增菌 肉汤 微需氧培养 阴性结果 无空肠弯曲菌 初筛方法检测 选择性平板进行分纯培养 阳性结果 经典培养鉴定方法 微生物手工/自动 生化鉴定系统 基因鉴定方法 谢谢大家！ * 粪便中空肠弯曲菌检测孙燕萍 一、空肠弯曲菌的分类和特性： 属于弯曲菌属。 主要包括空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）、结肠 或大肠）弯曲菌（Campylobacter coli）、海鸥弯曲菌（Campylobacter lari）、乌普色拉弯曲菌（Campylobacter upsalensis）、胎儿弯曲菌（Campylobacter fetus）等11种。 其中空肠弯曲菌（C. jejuni）对食品安全的威胁最为严重。 空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是从20世纪80年代起受到国内外广泛重视的人畜共患病菌。 致病性： 人类：急性细菌性肠炎、格林-巴利综合征 （GBS）、食物中毒。 动物：雏鸡腹泻与肝炎；火鸡的肝炎与蓝冠病。 犊牛的腹泻；绵羊的腹泻或流产。 空肠弯曲菌的生物学特性 革兰氏染色阴性。呈弧形，S形或螺旋形； 菌体两端尖，有极鞭毛，能做 快速直线或螺旋体状运动； 1.5～5μm×0.2～0.5μm， 无荚膜。 微需氧环境：5% O2、10%CO2和85%N2。 最适生长温度：42-43℃，37 ℃可生长，30 ℃以下不生长。 空肠弯曲杆菌的流行病学和临床表现 宿主： 家禽、野生鸟类为最主要的传染源。 Rosef 等在1981年调查了129个野生鸟类，结果 表明24.8%携带空肠弯曲菌 鸟类迁移会造成病原菌对湖水与河水的污染。 细菌分布范围 * 该菌分布广泛，已从多种动物中分离出；也发现于食物与饮水中，尤其是畜禽肉及脏器与鲜奶。 * 食用动物中鸡的带菌率为首位，其次为猪。主要分布在活鸡的消化系统中如腺胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、直肠、泄殖腔等。 * 该菌在人或动物的粪便中存活约4周；在被污染的水源中可存活约5周。 感染途径： * 传播途径主要是由于摄取了该菌污染的食物与 饮水后，细菌在人肠道内大量生长繁 殖，引起 急性肠炎。 * 被污染的禽肉与未经过巴氏消毒的牛奶是导致 发病的主要原因. 患者临床表现： 患者表现为发热、腹泻、呕吐或肌肉痛。潜伏期平均3-5天，病程约7-10天，粪便的特征是有时带血，镜检中有多形核白血球，重症病例也有痢疾样血、粘液粪便。 根据美国疾病控制与预防中心（USA-CDC）多年的美国食源性病原微生物引起发病人数的统计资料，空肠弯曲菌导致的病例数排名第二。禽肉、生牛奶中的空肠弯曲菌被美国列为重点监测食源性致病菌之一。 32nd CCFH（1999年）提出5组优先评估的“病原-食品”组合,其中包括“禽肉-空肠弯曲菌”。 空肠弯曲菌在许多发达国家也是被报告最普遍的胃肠炎致病菌之一，如：美国、英国、丹麦、芬兰、爱尔兰、荷兰、挪威、瑞典、瑞士等。 NCTC 11168 基因组图谱 基因组相对小，大小在1.6-1.7Mbp. DNA中富含A/T,G/C比率在29-47mol%.由于基因组体积小，对培养要求就比较苛刻。NCTC11168共有碱基对1.641.481个，含有1654个基因组。A/T的含量在69%。 二、粪便中空肠弯曲菌的检验技术2012年试行江苏省感染性腹泻综合监测工作方案 空肠弯曲菌 空肠弯曲菌： 在微需氧条件下42℃生长而25℃不能生长，在选择性固体培养基上形成特征性菌落，按照本标准检验时具有相符合的运动特性、生长特性与生化特性的革兰氏阴性菌。 设备和材料 微需氧培养装置: 能够提供微需氧条件（5% O2、10% CO2和85% N2 如使用产气剂的 厌氧罐/袋或其它 可代用的装置等。 三气培养箱（如Binder等 弯曲菌检验程序 增菌液接种 方法一：稀释处理 将24 h和48h的增菌液原液分别划线接种mCCDA平板. （备注：也可选用CFA显色平板或SimPlate分离鉴定及定量培养基） 优点：经济、方便 缺点：可能会有杂菌干扰 mCCDA平板上所挑取的可疑菌落通常带有金属光泽、扁平、湿润、沿划线生长。 CFA显色平板上所挑取的可疑菌落为红色、突起、湿