大肠杆菌和铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建讲解.docVIP

PAGE iv PAGE iii 大肠杆菌和铜绿假单胞菌中蛋白表达监测系统的构建 中文摘要 20世纪90年代，“人类基因组计划”的推进和完成，标志着“后基因组时代”的到来，“功能基因组学”中蛋白质组学的研究提上了未来生命科学研究的日程。目前蛋白质研究的主要方法是通过2-DE配合质谱对蛋白质的分离鉴定。虽然对蛋白质的研究技术在不断地改进，但是目前的生物化学技术已不能满足研究蛋白质组所需要的高灵敏度、高通量以及可规模化的要求，对于蛋白质组学的研究期待着新型的技术方法的突破。 本课题以大肠杆菌和铜绿假单胞菌为研究对象，采用了将带有RBS的目的基因克隆至缺失自身RBS的报道基因luxABCDE上游，构建二者共用RBS的预期的蛋白表达监测系统；报道基因的表达量取决于克隆基因的转录及翻译水平，利用发光值读取仪检测CPS值衡量目的基因蛋白质的表达量。对该监测系统进行验证，并将两种菌的全基因组克隆至各自相应的监测系统中，建立反映蛋白质表达情况的荧光值数据库。 在大肠杆菌中，将重组载体pUCNot-lux中得到的报道基因luxABCDE克隆至蛋白表达载体pPROEX HTa、pPROEX HTb、pPROEX HTc，初步构建得到大肠杆菌的蛋白表达监测系统，命名为pPROEX HTa-lux、pPROEX HTb-lux、pPROEX HTc-lux。报道基因luxABCDE在载体pPROEX