大连理工大学,生化实验报告讲解.doc

小牛肠碱性磷酸酶的提取及酶活测定、 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量、 SDS电泳法测定蛋 姓名 班级 摘要 本实验通过从小牛肠中提取小牛肠碱性磷酸酶，利用考马斯亮蓝法测定蛋白质含量，并测定酶的活性。最后通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量. 关键词 小牛肠碱性磷酸酶提取 酶活测定 考马斯亮蓝法 SDS电泳法 本实验分为三部分。先通过对牛小肠内膜的刮取，离心，沉淀析出等方法，提取牛小肠碱性磷酸酶；然后用考马斯亮蓝G-250与碱性磷酸酶结合，利用紫外分光光度计在一定波长下测定结合物的吸收波长，根据其吸光度与蛋白质结合物的含量成正比的关系测定蛋白质含量，进而测定出蛋白质的比活力；最后，通过SDS-聚丙烯凝胶电泳测定蛋白质相对分子量，分析所获得的电泳结果来推算出被测蛋白质分子量的近似值。 1 实验部分 1.1 试剂与仪器 1.1.1小牛肠碱性磷酸酶的提纯及酶活测定 1、 试剂 （1）正丁醇、丙酮（置-20℃冰箱保存） （2）1mol/L醋酸（HAC）、1mol/LNaOH、硫酸铵 平衡缓冲液：0.01mol/LTris-HCL,PH 8.0,(含1.0×10-3mol/LMgCl2和1.0×10-5mol/LZnCl2)。 底物缓冲液：1mol/L二乙醇胺-盐酸缓冲液（PH9.8，含0.5×10-3mol/LMgCl2）。 酶的底物溶液：用底物