大肠菌群检验作业指导书.docVIP

目的 1.1规定原水、砂滤后、碳滤后、精滤后、工艺水的大肠菌群的检验方法，保证按标准化操作。 2.0适用范围 2.1微生物检验室大肠菌群的检测。 3.0职责 微生物检验员负责按作业指导书进行检验。 4.0术语 （无） 5.0工作流程图（无） 6.0内容及要求 6.1 设备和材料 6.1.1生化培养箱：36±1℃ 6.1.2 净化工作台 6.1.3显微镜 6.1.4电子秤　 6.1.5三角瓶（250ml、500ml） 6.1.6试管（18×200mm） 6.1.7刻度吸管（1ml、10ml） 6.1.8酒精灯 6.2 培养基和试剂 6.2.1乳糖胆盐发酵培养基 6.2.2乳糖发酵培养基 6.2.3伊红美蓝琼脂（EMB） 6.2.4革兰氏染色液 6.2.5生理盐水（0.9%） 6.2.6乙醇（75%） 6.3操作步骤 6.3.1乳糖初发酵试验 取待检样品10ml、1ml、0.1ml 取样品1ml于9ml生理盐水中稀释 ，分别接种于含10ml双料、单料和单料乳糖胆盐发酵管内，各接种3管，置36±1℃电热培养箱内培养48±2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。 6.3.2分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置36±1℃生化培养箱内，培养18-24h， 取出。 6.3.3证实试验 用接种环挑取疑似大肠菌群菌落（菌落呈黑紫色，表面有金属光泽），接种于乳糖发酵管内，置36±1℃生化培养箱内培养24±2h小时，同时对上述可疑菌落进行革兰氏染色、镜检。凡乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠菌群阳性。 6.3.4报告 根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml样品中大肠菌群的最可能数。 MPN检索表如下： 接种量（ml） MPN/100ml 接种量（ml） MPN/100ml 1×3 0.1×3 0.01×3 1×3 0.1×3 0.01×3 0 0 0 30 2 0 0 91 0 0 1 30 2 0 1 140 0 0 2 60 2 0 2 200 0 0 3 90 2 0 3 260 0 1 0 30 2 1 0 150 0 1 1 61 2 1 1 200 0 1 2 92 2 1 2 270 0 1 3 120 2 1 3 240 0 2 0 62 2 2 0 210 0 2 1 93 2 2 1 280 接种量（ml） MPN/100ml 接种量（ml） MPN/100ml 1×3 0.1×3 0.01×3 1×3 0.1×3 0.01×3 0 2 2 120 2 2 2 350 0 2 3 160 2 2 3 420 0 3 0 94 2 3 0 290 0 3 1 130 2 3 1 360 0 3 2 160 2 3 2 440 0 3 3 190 2 3 3 530 1 0 0 36 3 0 0 230 1 0 1 72 3 0 1 390 1 0 2 110 3 0 2 640 1 0 3 150 3 0 3 950 1 1 0 73 3 1 0 430 1 1 1 110 3 1 1 750 1 1 2 150 3 1 2 1200 1 1 3 190 3 1 3 1600 1 2 0 110 3 2 0 930 1 2 1 150 3 2 1 1500 1 2 2 200 3 2 2 2100 1 2 3 240 3 2 3 2900 1 3 0 160 3 3 0 2400 1 3 1 200 3 3 1 4600 1 3 2 240 3 3 2 11000 1 3 3 290 3 3 3 24000 注：上表采用3个稀释度（1ml、0.1ml、0.01ml）,每稀释度3管；表内所列检样各增加10倍时，则表内数字相应降低10倍；表内所列检样各降低10倍时，则表内数字相应增加10倍；以此类推。 7.0相关文件 无 8.0质量记录表单 8.1?微生物检验报告单? 修改记录 修改次数 修改日期 修改条款 修改后的内容 修改人 1 2 3 4 5