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83正文-结果
2.结果
2.1目的基因在大肠杆菌中的表达：
将含Catalase /pGEX-4T-1的工程菌在1mmol/L IPTG的诱导下在大肠杆菌E.coli BL-21中表达，表达产物经12% SDS分析，在相对分子质量85kDa处可见明显的含目的基因Catalase的融合蛋白的表达。如图1：
A B
图1：SDS分析目的蛋白在E.coli中的表达
Catalase/pGEX-4T-1 expression in E.coli
A．小量诱导 B.大规模诱导
1. Protein Marker
2. Catalase/pGEX-4T-1 before induction
3. Catalase/pGEX-4T-1 after induction 4
.Catalase/pGEX-4T-1 before induction
5. Catalase/pGEX-4T-1 after induction
2.2 表达产物超声破菌：
工程菌经大规模培养诱导，表达产物超声破菌后，上清和沉淀中都有目的蛋白的存在，如图2：
图2 SDS分析表达产物的超声破菌
SDSanalysis of ultrasonication
1. Protein Marker
2. Catalase/pGEX-4T-1 before induction;
3. Catalase/pGEX-4T-1 after induction;
4. ultrasonic supernatant;
5. ultrasonic precipitation
2.3表达产物的亲和层析纯化：
将表达产物超声破菌后，上清和沉淀中都有目的蛋白的存在，取上清进行亲和层析纯化。用Glutathione Sepharose 4B对融合蛋白的表达上清进行纯化,用含有还原型谷胱甘肽的洗脱缓冲液洗脱，可见洗脱峰，如图3；纯化后的目的蛋白进行SDS分析，如图4：
图3 融合蛋白的纯化色谱图
Fig 3. Purification chromatogram of fusion protein
I: 上样和洗杂峰；II: 还原型谷胱甘肽洗脱峰
图4：SDS分析纯化的融合蛋白SDSanalysis of expressed product
1. Protein Markers 2.上样穿透 3.纯化融合蛋白Catalase/pGEX-4T-1
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