SDS-PAGE电泳实验讲稿资料.pptVIP

蛋白质的SDS电泳 一.实验目的 学习SDS测定蛋白质分子量的原理。 掌握垂直板电泳的操作方法。 二.实验原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(AP)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 分子量范围与凝胶浓度的关系 丙烯酰胺浓度（%） 线性分离范围（kD）? 15 12～43 10 16～68 7.5 36～94 5.0 57～212 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） ：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶电泳时，它的迁移率取决于它所带净电荷以及分子的大小和形状等因素。如果在丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠(SDS)，则蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。因此可以利用SDS测定蛋白质分子量。 当蛋白质的分子量在15KD—200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。 凝胶由分离胶和浓缩胶组成： 上层为浓缩胶，凝胶孔径较大，没有分子筛效应，其pH为6.8，由于快慢离子所形成的高电压梯度，使得变性蛋白质分子在泳动中被压缩为很薄的一层，大大提高了分