实验三酶的固定化技术.docVIP

实验三、酶的固定化技术 一、实验目的 1 了解细胞固定化的原理和方法。 2 学习和掌握酵母细胞固定化的方法。 二、实验原理 在微生物胞内酶的发酵生产和应用中，由于要进行细胞破碎和酶的分离纯化等操作，提取的酶往往活性和稳定性都大受影响。如果将微生物细胞固定化后，既避免了复杂的细胞破碎、提取和纯化过程，而且酶活性和稳定性也得到较大提高，更可以作为固体催化剂在多步酶促反应中应用并可进行连续操作。 微生物细胞固定化方法主要有3种基本类型：载体结合法、交联法和包埋法。其中包埋法是最常用、也最有效的固定化方法。所谓包埋法是将微生物细胞均匀地包埋在多孔的水不溶性载体的紧密结构中，细胞中的酶处于活化状态．因而活性高、活力耐久。目前己广泛使用的多孔载体有K—角叉胶、胶原、琼脂糖、果胶、海藻酸盐、聚苯乙烯、二乙酸纤维素、环氧树脂、聚丙烯酰胺、聚亚胺酯和聚酶等，其中以海藻酸盐、角叉胶和聚丙烯酰胺最为常用。本实验以海藻酸盐为例，介绍酿酒酵母的固定化方法。 三、实验器材 1 活材料：干酵母 2 培养基：10%葡萄糖溶液 3 试剂： 1 0.05mo1/L CaCl2溶液。 无水CaCl2 4.75g，去离子水1000mL，pH7.0，121℃灭菌15min。 2 葡萄糖，海藻酸钠，无菌水。 4 器材：烧杯，平皿，试管，无菌的250、500mL三角瓶，带玻璃喷嘴的小塑料瓶。 四、实验方法 1 干酵母放入50ml小烧杯中，加入蒸馏水10ml，用玻璃棒搅拌，使得酵母细胞混合均匀，放置1h，使其活化。配制物质的量浓度为0.05mol/l的CaCl2溶液。 2 称取2g海藻酸钠于无菌小烧杯中，加无菌水少许调成糊状，再加够10mL水，适当加热溶化。 3 将溶化好的海藻酸钠溶液冷却至45℃左右，加入已经活化的酵母培养液，混合均匀。倒入一个无菌的小塑料瓶中，通过一个孔径为2mm的注射器，以恒定速度滴到250mL二角瓶中，瓶中预先盛有50mL含10％葡萄糖的0.05mol/CaCl2溶液，使形成凝胶珠。 4 待凝胶珠在溶液中浸泡30min后转至500mL三角瓶中用无菌水洗涤三次后加入300mL无菌葡萄糖溶液中，置25℃下发酵24h。发酵结束后品尝其口味，测定其酒精含量。 五、结果与分析 1、观察描述形成的凝胶珠的颜色和形状 2、观察利用固定化酵母细胞发酵的葡萄糖溶液，是否有气泡产生，是否有酒味。