Biacore实验步骤.docVIP

L、利用BIAcore通过表面胞质基因共振光谱学分析相互作用的蛋白质 RAMc通过伯氨基与CM-5传感芯片表面的结合 1．将CM-5传感芯片模块嵌入BIAcore仪器。 2．全部采用过滤并除气的HEPES缓冲盐溶液。 3．将分别含有NHS、EDC、乙醇胺和RAM Fc以及20 mmol/L HCl各100μl的小管置于BIAcore自动进样器架的适当位置。 4．将一个空管置于BIAcore自动进样器架上。 5．开动仪器，以5μl/min的流速流过一个流动池。 6．将75μl的NHS加入到一个空管中。 7．在同一个管中再加入75μl的EDC。 8．将含有NHS和EDC的小管中的成分混匀。 9．注射35μl NHS/EDC混合物使表面活化。 10．放置一个基线报道点注射35μlRAM Fc到活化表面与抗体结合。 11．注射35μl乙醇胺使过量的反应基团失活。 12．快速注射10μl的20 mmol/L HCL，然后用Extraclean除去非共价结合型材料。 13．通过在开始注射RAMc前放置一个基线报道点，并在注射20 mmol/L HCl结束后2 min放置第二个报道点，来测定结合RAMc水平。 14．关闭流动液，关闭命令窗口，保存报道文件。 检测抗-TSH与RAMc表面的结合 15．开动仪器，使含有结合RAMc的流动池流速为10μl/min。 16．注射10μl的2μg/ml抗-