3蛋白质结构与功能修改.ppt

（一）有关四级结构的一些概念 自然界中有些蛋白质是以一条多肽链独立折叠成球状蛋白质，大多数是以多个亚基通过非共价键彼此缔合在一起形成一个有功能的蛋白质分子这种聚合体的方式成为蛋白质四级结构。一个亚基一般是一条多肽链。 （二）四级结构缔合的驱动力 稳定四级结构的力与稳定三级结构的力无区别，包括氢键、范德华力、二硫键、疏水键和离子键，四级结构缔合的驱动力起重要作用的是疏水键和二硫键。 （三）亚基相互作用的方式 蛋白质亚基之间紧密接触的界面存在极性相互作用和疏水作用。因此极性基团和疏水基团互补排列，而亚基缔合的专一性则由相互的表面上的极性基团之间的离子键和盐键提供。 当蛋白质只有一种亚基组成时亚基的相互作用和排列四级结构方式比较简单，如果涉及到不同亚基构成的蛋白质时亚基之间的性互作用可以是十分复杂。 （四）四级结构的对称性 对称性时蛋白质四级结构最重要的性质之一。大多数的寡聚蛋白质分子的亚基排列都是对称性的。最简单的是对称二聚体，复杂的有立方点群对称形成对称四面体、八面体、二十面体等许多球形病毒的外壳蛋白是二十面体对称结构。螺旋点群对称形成螺旋对称聚集体，如烟草花叶病毒（TMV）外壳蛋白质。 第五节蛋白质的分离纯化 一、蛋白质的酸碱性质 二、蛋白质分子的大小和形状 三、蛋白质的胶体性质和蛋白质的沉淀 四、蛋白质分离纯化的一般原则 五、蛋白质的分离纯化方法 六、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 一、蛋白质的酸碱性质 蛋白质也使一类两性电解质,能与酸反应也能与碱发生反应。蛋白质可解离的基团来自侧链的功能团，少数N－，C-末端，如果是复杂蛋白还包括辅基上可解离的功能团。蛋白质上基团可解离性决定于环境的pH值，在某pH下，使某一蛋白质的净电荷为零。这一pH值就是这一蛋白质的pI。蛋白质的等电点与组成它的酸性氨基酸或碱性氨基酸数目及比例有关。 解离基团 几种蛋白质的等电点 （七）蛋白质分子的形状 测定蛋白质分子的形状和构象，最精确的仍是用X射线晶体衍射技术。但这只能给出蛋白质晶体的立体结构信息，而蛋白质在溶液中的性状或沟象的信息到目前没有更好的方法，只能借用其他的间接方法获得。 X-ray 研究蛋白质大分子结构 三、蛋白质的胶体性质和蛋白质的沉淀 （一）蛋白质的胶体性质 （二）蛋白质的沉淀 （一）蛋白质的胶体性质 蛋白质分子量在1万－－百万之间，在溶液中是以颗粒的形式存在，因为溶质分子在溶剂中，如果溶质的颗粒1nm,称为真溶液；1nm—100nm范围称为胶体溶液；颗粒100nm称为悬浊液。 分散质点在胶体系统中如果保持稳定，必须满足3个条件： 1、分散相质点在1－100之间，在动力学上是稳定的，质点间的碰撞和力不为零，使之能在介质中作布朗运动。 2、分散相带有同种电荷相互排斥，不易聚集成大颗粒而沉淀。 3、质点能与水形成水化层。 而蛋白质在溶液中正好符合上述条件。蛋白质在溶液中分散的程度来说，它属于胶体系统。蛋白质分子表面带有很多高度亲水的基团，吸附了大量的水分子在蛋白质分子上形成较厚的水化层，这些水化层将蛋白质颗粒相互分开不易聚成大的颗粒，因此蛋白质溶液是比较稳定的亲水胶体溶液。 蛋白质溶液也像其他胶体溶液一样，具有丁达尔效应、布朗运动以及对半透膜的不同透性。 蛋白质的亲水性和稳定性对生命来说是十分重要的，生物体内水几乎占80％。 （二）蛋白质的沉淀 蛋白质在溶液中的稳定性是有条件的、相对的如果条件发生改变，破坏了蛋白质溶液的稳定性。蛋白质分子就会从溶液中沉淀出来。这个过程称为蛋白质的沉淀。为研究蛋白质的性质，有时要用这种方法将蛋白质从溶液中沉淀出来，有如下方法： 1、盐析法：向蛋白质溶液中加入大量的中性盐使蛋白质脱水失去水化层而聚集从溶液中沉淀。盐析沉淀的蛋白质不引起蛋白质的变性。 2、有机溶剂沉淀法：向蛋白质溶液中加入大量的有机溶剂，使蛋白质脱去水化层，并降低溶液的介电常数，使蛋白质沉淀出来。（需在低温的条件下，以免使蛋白质变性）。 3、重金属盐沉淀法：但溶液PH值大于等电点时，蛋白质带有负电荷易于与金属离子反应生成重金属盐沉淀。可使蛋白质变性。 4、生物碱和某些有机酸沉淀法：鞣酸、苦味酸、三氯乙酸水杨酸等可使蛋白质变性沉淀。 5、加热变性沉淀法： 几乎所有的蛋白质加热到一定程度时都会变性沉淀。如果在一定离子强度下，沉淀更彻底，如豆腐和酪蛋白的制作。 四、蛋白质分离纯化的一般原则 蛋白质在生物组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在，每种组织或细胞中都含有大量各种各样的蛋白质，而研究蛋白质时需要得到蛋白质的单一纯品，这是一个极艰巨的工作。到目前为止，没有一个单独的分离纯化程序能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中纯化出的方法