荧光显微镜的使用与显微摄影解析.ppt

光源 中间象 物镜 样品 聚光镜 目镜 电子枪 聚光镜 样品 物镜 中间象 投影镜 观察屏 照相底板 虚象 三、透射电镜的样品制作 （一）超薄切片法 主要步骤： 取材 固定 洗涤 脱水 浸透 包埋 聚合 修块 切片 装网 电子染色 上镜观察 1、取材 1mm3（或mm2） 活体取材，低温，4oC。 刀片锋利，动作轻巧迅速。 2、固定 电镜常用固定剂： 戊二醛、锇酸 固定方法： 戊二醛—锇酸双固定 前固定 2.5%戊二醛溶液，4oC，1—4小时。 洗涤 0.2M磷酸缓冲液，pH 7.4，5 — 6次，每次10分钟。 后固定 1%的锇酸溶液， 4oC，1小时。 洗涤 0.2M磷酸缓冲液，pH 7.4，3 —4次，每次10分钟。 c、注意事项 温度 在低温下进行，4oC。 时间 与固定液的浓度、种类有关。不可随意更改。 固定液的pH 接近组织的pH。 固定液的浓度 浓度过低，会发生组织肿胀、抽提； 浓度过高，组织收缩或遭破坏。 固定液的渗透压 应该接近组织液的渗透压。 3、脱水