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VIDAS 大肠杆菌O157 (ECO)筛选 文章出处：长源科技 发布时间：2005-08-07 仅用于实验室 应用范围 　　VIDAS大肠杆菌O157 (ECO)分析，采用Vitek免疫诊断分析系统（VIDAS）作为自动定性酶联荧光免疫分析(ELFA)，对食品中的大肠杆菌血清型O157进行检测。 前言 　　大肠杆菌0157时公认的出血性肠炎的病原菌，在美国、加拿大、英国、日本以及比利时造成数起爆发感染〈4，8〉。除牛奶、苹果汁及肉产品可引起感染外，最常见的感染源还是牛肉。肠痉挛和血性腹泻是0157：H7感染后的典型症状。约10%的病人发展成急性肾衰（血尿综合征）。易感人群多为5岁以下小孩及老人（8）。VIDAS ECO分析为一种对大肠杆菌0157快速筛选方法，能够保证对有动力和无动力的菌株进行检测。最新研究表明致病性大肠杆菌0157血清型可能有无动力菌株(3)。 检测原理 　　VIDAS大肠杆菌O157 (ECO)分析，是一种在自动VIDAS仪器上进行的酶联荧光免疫分析（ELFA）方法。固相容器（SPR）是一个类似于加样头的一次性使用装置，在检测中起固相及加样器之用。SPR用抗大肠杆菌O157抗体包被。各种试剂均封闭在试剂条内。　　所有检测步骤均自动由VIDAS仪器完成。煮沸过的增菌肉汤加入试条孔后，在特定时间内，样本在SPR内、外反复循环。样本中的O157抗原与包被在SPR内部的O157抗体结合，未结合的其他成分通过洗涤步骤清除。标记有碱性磷酸酶的抗体也在SPR内、外循环并与固定在SPR壁上的大肠杆菌0157抗原结合，最后洗去未结合的抗体标记物。　　SPR中所用荧光底物为磷酸4-甲基伞型物。仍结合在SPR壁上的酶将催化底物转变成具有荧光的产物：4-甲基伞形酮。在VIDAS中由光扫描器在450nm处检测该荧光强度，试验完成后由计算机自动分析结果，得出检测值，并打印出每份样本的实验报告。 VIDAS大肠杆菌O157试剂盒组成（30个人份/每盒） 30个ECO试剂条 参考下表 30个ECO SPR ECO SPR的内面制造时已用抗大肠杆菌O157多克隆抗体包被。 1瓶标准液(3ml) S1 纯化，灭活的大肠杆菌O157抗原，含1g/l叠氮钠和蛋白稳定剂。 一瓶阳性对照(6ml) C1 纯化，灭活的大肠杆菌O157抗原，含1g/l叠氮钠和蛋白稳定剂，瓶签上有对照范围。 一瓶阴性对照(6ml) C2 TRIS-NaCl-Tween(150mmol/l),含1g/l叠氮钠 MLE 卡 包含校正测试所需的工厂校正数据。 说明 SPR 　　SRP在生产时以抗大肠杆菌0157多克隆抗体包被。每一SPR上均标有“ECO”。从包装袋中取出SPR后要及时封闭包装袋。 试剂条 　　包含10个以箔封的孔，并覆以标签，标签上有条形码，显示测试种类，试剂盒批号、有效期等。第一孔加入样本，最后一孔是荧光测定用比色杯。中间各孔含有实验用各种试剂。 大肠杆菌O157试剂条说明 孔 试剂 1 样本孔：此孔加0.5ml煮沸过的增菌肉汤。 2 前洗涤液（0.4ml）: TRIS-NaCl(150mmol/l)Tween pH7.6+1g/l叠氮钠。 3 - 4 - 5 - 7- 8 - 9 洗涤液（0.6ml）: TRIS-NaCl(150mmol/l)Tween pH7.6+1g/l叠氮钠。 6 酶标记物（0.4ml）:用碱性磷酸酶标记多克隆抗体（羊），含1g/l叠氮钠。 10 含底物（0.3ml）的比色杯：磷酸4-甲基伞形物(0.6mmol/l)+ 二乙醇胺（DEA）(0.62mol/l或6.6%,pH9.2)+1g/l叠氮钠。 实验名称、批号和校正参数均在MLE卡上标明并作成仪器可读的条形码。 未提供但应具备的设备 - 加样器：最小加样量为0.5ml。- 水浴箱（100℃）或相当装置。 注意事项 　　? 试剂盒的所有试剂均为潜在生物危险材料。因此，通过可接受的方法来处理所有使用过　　? 的试剂和其它污染材料。　　? 请勿使用超出有效期的试剂。　　? 不同批号试剂请勿混合使用。　　? 试剂中含1g/l叠氮钠，该物质可与铅或铜管道反应形成爆炸性金属叠氮物。如果含叠氮钠的液体在这样的管道系统中处理，要用大量的水冲洗以避免形成金属叠氮物。　　? 常规清洁和清洗VIDAS仪器，参阅VIDAS操作手册有关步骤。 保存 - VIDAS ECO试剂盒存于2-8℃。- 勿冷冻试剂。- 使用后余下的试剂放回2-8℃。- 打开试剂盒后，S