1生物化学教程(蛋白质的性质)课件.pptVIP

第五节 蛋白质的重要性质 （一）蛋白质的两性解离和等电点（pI） （二）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 （三）蛋白质的变性 （四）蛋白质的水解 （五）蛋白质的颜色反应 （一）蛋白质的两性解离和等电点（pI） １、两性解离 ２、蛋白质的等电点（pI） ３、电泳 １、两性游离 NH3 + ∕ Pr ＼ COOH ２、蛋白质的等电点（pI） 当溶液处于某一pH值，蛋白质分子所带正、负电荷相等，净电荷为零，呈兼性离子状态，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点（pI）。 不同的蛋白质，其等电点（pI）不同。 pI是蛋白质的特征性常数。 利用蛋白质两性电离的性质，可通过电泳、离子交换层析、等电聚焦等技术分离蛋白质。 几种蛋白质的等电点（pI） 蛋白质名称 来源 pI 血清蛋白 人血 4.64 肌球蛋白 肌肉 7.0 胃蛋白酶 猪胃 2.8~3.0 胰蛋白酶 胰液 5.0 卵清蛋白 鸡蛋 4.8~4.9 白明胶 动物皮 4.8 ３、电泳 带电颗粒向与其电荷相反的电极方向移动。 意义：用于蛋白质的分离、纯化鉴定和分子量的测定。 血清蛋白电泳图谱： 电泳 蛋白质在等电点pH条件下，不发生电泳现象。利用蛋白质的电泳现象，可以将蛋白质进行分离纯化。 电泳方法： （二）蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 1、蛋白质是高分子化合物，分子量多在1万~100万之间。 2、球状蛋白质的颗粒大小达1~100 nm范围，故蛋白质有胶体性质。蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体。 3、蛋白质分子大，不能透过半透膜。 4、蛋白质在一定的溶剂中，经超速离心，可发生沉降。 蛋白质的胶体性质 颗粒大小：在1～100nm之间。属胶体。因此溶于水，成为亲水胶体。 稳定亲水胶体的因素： 水化膜 表面电荷 不通透性：半透膜 透析的原理： 透析 将蛋白质溶液 不纯 放入透析袋中，放在流水中（纯水），让低分子杂质（如盐类）透过半透膜扩散入水内，蛋白质则留在袋中，分离纯化蛋白质。 沉降作用 1、沉降概念： 蛋白质溶液经高速离心分离时，由于比重关系，蛋白质分子趋于下沉，离心管底部的蛋白质浓度增高。 2、沉降速率： 在离心时，蛋白质分子在单位时间t（以秒计）内下沉的距离x（以cm计）。以v表示。 v dx/dt 沉降作用 1、沉降概念： 2、沉降速率： v dx/dt 3、沉降常数（沉降系数，S） 单位引力场沉降分子下沉的速率。 S v /ω2x v：沉降速率（dx/dt）可以从实验测得。 ω：离心机转子每秒钟的角速度，以弧度/秒计。（即2Л ×转子每秒钟的转速） x：蛋白质界面中点与转子中心之间的距离（以cm计）。 Svedberg单位的定义： 单位引力场沉降分子下沉的速率。 取 1 ×10-13秒为一个Svedberg单位。 例： ①牛血清清蛋白的沉降常数为:4.4×10-13 用Svedberg单位则为: 4.4 S ②原核细胞核糖体的沉降常数为:70×10-13 用Svedberg单位则为: 70 S 蛋白质的沉淀 1、概念：蛋白质分子发生凝聚，从溶液中析出的现象。 2、蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体。 稳定因素：水化膜 电荷 破坏稳定因素，就可使蛋白质颗粒凝聚而沉淀。 3、沉淀方法： ①盐析法 加高浓度中性盐使蛋白质沉淀析出。 NaCl、 （NH4）2SO4、NaSO4等。 破坏蛋白质胶体周围的水化膜，中和了蛋白质分子的电荷，使蛋白质沉淀而析出。 分段盐析：调节盐浓度，可使混合蛋白质溶液中的几种蛋白质分段析出。 分离制备蛋白质的常用方法。 ②有机溶剂沉淀 有机溶剂：乙醇、丙酮等。 破坏蛋白质颗粒表面的水化膜。 pH pI时，可加速蛋白质沉淀。 低温（0℃∽4 ℃）。 ③重金属盐沉淀　 ④某些酸类沉淀　 一些常见的蛋白质沉淀剂 １、盐：破坏水膜，中和电荷 　　盐溶、盐析的概念 ２、有机溶剂：破坏水膜 ３、重金属盐： ４、一些酸类物质：与蛋白质生成不溶性盐。如：苦味酸、单宁酸、 4、应用： 蛋白质的分离制备 灭菌技术 生物样品的分析、杂质除去等都要涉及此反应。 （三）蛋白质的变性 1、概念： 蛋白质在某些理化因素的作用下，其空间结构（次级键，特别是氢键）被破坏，从而改变其理化性质，并失去生物活性，这称为蛋白质的变性。 蛋白质的变性 （三）蛋白质的变性 2、变性因素： ①物理因素：加热、高压、振荡或搅拌、紫外线照射、超声波及Ｘ射线等。 ②化学因素：强酸、强碱、重金属离子和尿素、乙醇、丙醇等有机溶剂。 3、变性实质：维系蛋白质空间结构的次级键断裂，其特定的空间结构被改变或破坏。 二硫键和非共价键的破坏引起空间结构的改变，不涉及一级结构的改变。 蛋白质变性的主要标志是生物功能的丧失。 介电常数 介电常数是两种电荷被真空