《动物细胞工程学》实验课教学大纲.docVIP

《动物细胞工程学》实验课程教学大纲 实验名称：动物细胞工程学实验 课程编码：0141014 学时：32 学分：2 适用专业：生物工程 执笔人：唐业刚 审订人：郭云贵 课程的性质与任务 动物细胞培养技术是动物胚胎工程技术的基础和核心技术，开设该门实验课的最大任务和任务就是让学生掌握动物细胞培养技术的原理和基本方法，锻炼学生的专业素养。应此，在教学过程中应着重培养和锻炼学生自己寻找感兴趣的小课题并能运用理论和实验操作知识独立进行实验设计、实验可行性等这种提出问题、分析问题和解决问题的能力。 二、教学目标与基本要求： 了解动物细胞培养实验室的设计和基本设备。 理解动物细胞培养的实验原理和常用基本仪器设备的作用。 掌握常见大型仪器的使用方法和原代细胞培养、传代培养的流程和方法。 三、实验项目与类型： 序号 实验项目 学时 实验性质 备注 演示 验证 设计 综合 必做 选做 1 动物细胞一般培养过程教学录像观摩实验室组成设计及实验容器具的洗涤、包扎和灭菌 常用细胞培养用液的配制鸡胚成纤维细胞的原代培养消化法鸡胚成纤维细胞的传代培养 MTT法绘制细胞生长曲线 4 √ √ 8 小鼠胚胎干细胞的分离与培养 4 √ √ 四、实验教学内容及学时分配： 实验一、动物细胞一般培养过程教学录像观摩?………………………………………（4学时） 1.目的要求：了解动物细胞培养实验室组成、仪器及细胞培养的一般过程。 2.方法原理：通过观看教学录像，以及参观实验室，加深对动物细胞培养条件的理解；通过学习教学录像内容，认识到无菌操作技术在整个细胞培养实验中的重要作用。 3.掌握要点：熟悉动物细胞培养的总体流程认识到动物细胞培养比其他实验要求更高、更严。 实验内容： 讲述动物细胞培养的发展历史。 观看录像，利用PPT多媒体教学手段观看细胞培养教学录像。 参观实验室的仪器设备及实验室设计，讲解仪器使用方法及实验室设计思路。 简要介绍该课程整体实验项目，课程考核方式及成绩评定办法等事宜说明。 实验二、实验室组成设计及实验容器具的洗涤、包扎和灭菌………………………（4学时） 1.目的要求： 掌握清洁液的配置方法；掌握动物细胞培养所用器皿的种类、作用及清洗灭菌方法；掌握滤器的使用方法 2.方法原理： 体外培养的动物细胞对微量有害物质十分敏感，了获得较好培养效果，对培养容器具的无害化处理是十分重要的。 3.主要实验仪器及材料： 电热鼓风干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、三重玻璃蒸馏器、澡盆、脸盆等；橡胶手套、一 次性塑料手套、医用纱布、牛皮纸、硫酸纸，棉线等。 4.掌握要点： 清洁液的配制方法；玻璃器皿、塑料制品和金属制品的洗涤、包扎及灭菌的程序和方法；滤器的使用方法 5.实验内容： 清洁液的配置；玻璃器皿和塑料制品的清洗、包扎和灭菌；滤器的使用 实验三、常用细胞培养用液的配制……………………………………………………（4学时） 1.目的要求： 掌握几种常见细胞培养用液的配制和灭菌方法；了解每种细胞培养用液的作用。 2.方法原理： 细胞培养用液是直接与细胞接触的，它的配制是细胞培养前的重要环节。 3.主要实验仪器及材料： 三重玻璃蒸馏器、高压蒸汽灭菌锅、电热干燥箱、无菌操作台、0.22um一次性微孔滤器及滤膜、磁力搅拌器、电子天平、烧杯、容量瓶、量筒、玻棒等。 4.掌握要点： 滤膜的检测及过滤除菌方法；胎牛血清的解冻、灭活及使用方法；各种细胞培养用液的配置方法 5.实验内容： D-hanks液的配制；D-PBS的配制；胰蛋白酶溶液的配制；RPMI1640、DMEM培养基的配制 实验四、鸡胚成纤维细胞的原代培养（消化法）………………………………………（4学时） 1.目的要求： 掌握动物细胞原代培养的一般方法和原理；能利用课堂所学对自己感兴趣的小项目自己动手设计方案并具体实施。 2.方法原理： 细胞存在于组织中，生理状况下细胞细胞之间联系紧密，胰酶消化液和EDTA液可以离散这些紧密联系的细胞，使细胞从组织中脱离出来，收集后培养就可以得到大量细胞。 3.主要实验仪器及材料： 医用手术器械、托盘、超净台、倒置显微镜、温箱、低速离心机、吸管、细胞培养瓶、烧杯、离心管、150目不锈钢网筛等、9日龄鸡胚、 0.25％胰酶液、D-hanks液、DMEM培养基、小牛血清。 4.掌握要点： 细胞原代贴壁培养的一般方法和原理；原代培养过程中的无菌操作。 5.实验内容： 取材、洗涤、剪切、消化、终止消化、过滤、收集滤液离心、制细胞悬液、计数及活性检查、接种和观察。 实验五、鸡胚成纤维细胞的传代培养…………………………………………………（4学时） 1.目的要求： 掌握动物细胞传代培养的一般方法和原理；能利用课堂所学独立完成相关实验。 2.方法原理： 利用胰蛋白酶将细胞从瓶壁上游离出来，