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PCR 产物克隆实验步骤 在微量离心管中加入下列试剂 Pmd-19T vector 1ul DNA 1ul Dh20 3ul 2.加入5ul的solution 1 3.16度反应30min 4.将10ul反应液全部加入100ul感受态细胞，轻轻旋转离心管，混匀，冰浴静置30分钟 5.42度水浴90秒，冰浴2min 6.加入500ulLB培养基（不含抗生素），混匀后37度，150rpm，摇床振荡培养45min，目的使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏； 7.在无菌条件下，取适量菌液（转化质粒在10ng时，90mm的平皿涂100ul，55mm涂50ul，连接产物于4度保存，根据平板上菌落生长的情况决定是否保留）均匀加到含相应抗生素的LB固体培养基平板中，用无菌的细菌涂布器将细胞均匀涂开，等平板中的液体完全吸收后，导致平板，37度12-16小时 8. 2*taq PCR MasterMIX 模板 10pg-1ug WF 1UL WR 1UL 2*MASTERMIX 12.5UL Ddh20 补至25ul 9 反应条件 94 3min 94 30sec 55 30sec 72 1min 72 5min 10. 5ul电泳 2011-3-8 陆旭主任医师查房记录 患者一般情况良好，生命体征平稳，查体同前，陆大夫查看病人后指示，患者目前诊断为右胸壁肿物，不除外右侧乳腺癌术后复发。现完善相关检查，注意监测生命体征，限期手术。今日完善B超引导下肿物穿刺活检术，指导下一步治疗方案。遵执。 2011-3-9 陆旭主任医师、肖文政主治医师查房记录 患者未诉不适。查体同前。昨日行B超引导下肿物穿刺，病理结果未回报，空腹血糖回报：8.8mmol/l，陆旭主任医师、肖文政主治医师查房看病人后建议:今日监测血糖，遵执。 2011-3-5 患者未诉不适。查体：生命体征平稳。继续目前治疗，完善术前检查，及时对症处理，观察病情变化。 2011-3-7 肖文政主治医师查房记录 患者未诉不适。查体同前。今日右乳肿物穿刺病理结果回报示右乳导管内原位癌，高分化。麻醉科会诊后建议：1、按神经内科建议术前予丙种球蛋白冲击，增强对手术的耐受性，持续使用溴吡斯的明；2可采用喉罩全麻，尽量减少术中肌松药的应用；3、术后入ICU病房观察，避免肌无力危象的发生，若术后患者出现呼吸困难，尽早呼吸支持治疗。肖文政主治医师查房看病人后建议：患者目前右乳癌诊断明确，继续完善术前检查，限期手术治疗。 2011-5-31 肖文政主治医师查房记录 患者未诉不适。查体同前肖文政主治医师查房看病人后建议：患者目前右乳结节诊断尚不明确，完善术前检查，限期手术治疗，术中冰冻明确诊断，指导下一步治疗。 2011-6-2 李波主任医师、肖文政主治医师查房记录 患者一般情况可，无明显不适主诉。查体同入院。血化验结果，胸片，心电图未见明显异常。陆旭主任医师、肖文政住院医师查房嘱，患者术前检查已完善，无绝对手术禁忌症，拟定于明日手术，关于术中术后可能出现的风险及意外已向患者及家属说明，均表示理解，并签字同意手术。