从猫豆中提取左旋多巴2.docVIP

一．左旋多巴 左旋多巴L-DOPA） 化学名：L-3,4-二羟基苯丙氨酸（L-3，4-Dihydroxyl phenylalanin） 2.物理常数 名称 化学式 熔点 沸点 分子量 密度 比旋光度 左旋多巴C9H11NO4 295℃ 448.4 °C 197.19 1.468g/cm3 -11.7° (c=5.3, 1N HCl) 3.理化性质 （1）具有临二酚结构，性质不稳定，极易被空气中的氧气氧化变质。 （2）水溶液久置后，可变黄、红、紫，直至黑色。高温、水、光、碱、重金属可加速其变化。 二．左旋多巴的L-DOPA可以通过血脑屏障，在脑组织中可脱羧形成多巴胺，可增加多巴胺含量而达到治疗帕金森氏病的功效。L-DOPA还有其他许多用途，可用来治疗腿多动综合症、肝昏迷、CO中毒、锰中毒和精神病、心力衰竭、溃疡病、脱毛症、调节人的性功能等。 （1）抗帕金森病 左旋多巴在脑内转变为多巴胺，补充纹状体中多巴胺的不足，因而具有抗帕金森病的疗效。用左旋多巴治疗后，约75%的患者获得较好疗效。治疗初期疗效更显 （2）治疗肝昏迷 用左旋多巴能在脑内转变去甲肾上腺素。使正常神经活动得以恢复，患者可由昏迷转为苏醒。因不能改善肝功能，作用只是暂时性的 （3）保健美容 人们发现L-DOPA有抗衰老的神奇功效。在日本有人利用酪氨酸酶将L-酪氨酸转化，经L-DOPA氧化形成黑色素，作为染发的商品出售。L-DOPA是一种在医药卫生、保健美容等诸方面有显著功效的氨基酸衍生物。 三．左旋多巴的来源 1.天然：蚕豆是少有的含有左旋多巴的普通食品。从植物中撮L-DOPA由于受到原料来源的限制，产量小，远不能满足市场需求。 （2）利用基因工程菌合成L-DOPA 90年代初人们开始运用基因工程的手段获取TPL的基因片段，然后连接到不同的载体中让其在宿主细胞中高效表达。 四．国内外研究概况 60年代末，国外一些学者开始致力于微生物酶法合成L-DOPA的研究。70年代初，日本学者Yamada等对微生物酶法合成L-DOPA进行了深入的研究，通过菌种选育及发酵条件的优化于1993年在味之素公司投入工业化生产。目前国外L-DOPA的产率超过100mg/ml。80年代后期，武汉大学的彭珍荣等在国内首先开展了微生物法合成L-DOPA的研究，但至今国内尚未有工业化的报道。虽然现在国内有多家制药厂生产L-DOPA及其药剂，但大都是从植物中提取的。 为了获得纯净的符合标准的产品，必须有适宜的L-DOPA的提取方法。利用微生物发酵法生产L-DOPA，其最终发酵产物含有许多不溶和可溶性杂质，必须采用适当的方法除去这些杂质，分离出纯净的L-DOPA。从发酵液中提取L-DOPA的一般步骤为（1）离心去掉菌体等不溶物（2）采用适当方法除去一些可溶性杂质，有必要还需脱色（3）浓缩得到结晶，再采用一定的方法纯化，得到纯净的晶体。 以L-酪氨酸为底物用微生物发酵法生产L-DOPA，最后的发酵产物为棕黑色液体，要从其中提取出纯净的L-DOPA，首先必须进行脱色，活性炭脱色法的人们广为使用脱色方法。但活性炭对各种天然氨基酸具有吸附作用，对芳香族氨基酸表现出最强的吸附力，吸附率达20%左右，因此在L-DOPA提取过程中用活性炭脱色损失较大。近来，有许多研究者研制和寻找新的替代活性炭的脱色剂。 （1）Hitoshi Enei等以活性炭层析法来分离纯化L-DOPA，他们将最终发酵产物的pH用浓盐酸调至1.0，然后酸洗，水洗，最后以氨水洗脱，洗脱液经浓缩后调pH至3.5，得到沉淀以酸碱法重结晶得到纯净L-DOPA，得率56%。 （2）Tomohisa Nagsaki等最终发酵产物用10%HCI调pH至2.5；然后离心去掉菌体等不溶物，上清液经真空浓缩后，用乙酸乙酯洗两次，调pH至4.5，放置过夜得粗结晶，粗结晶用等电点沉淀法纯化两、三次，用热水溶化，重新结晶两次，获得较纯晶体，得率为50%。 （3）Katsuji haneda 等 等采用Dowex 50-4X（200-400目）H+-型树脂来分离L-DOPA。 （4）Kaiser，AL-DOPA。 （5）Sealock R.R和Brenner.M.用铅复合物法来提取L-DOPA，但此方法步骤较多，且产品中可能有对人体有害的铅。 （6）Blocker.P.等用液态离子交换。 （7）Micker.D.等发现，在低于30℃的情况下，从过饱和的溶液中结晶出来的L-DOPA为针形晶体，比高于30℃情况下结晶出来的立方形晶体更纯，针形晶体在加热的情况下可变成立方体形晶体。 （8）日本在L-DOPA的提取方面作了大量的研究，他们向反应液中添加L-DOPA的无水结晶，在25℃以下继续反应，无水结晶不断析出。反应在25℃以上可析出一水结晶，但向其中加入无水结