国家自然科学基金223汇编.doc

报告正文 立项依据与研究内容（4000－8000字） 1、立项依据（附主要参数文献目录） 本研究之理论假设和意义 Th2细胞因子IL-4介导的Stat6信号传导通路在维持Th1/Th2免疫反应平衡中扮演重要角色，对Stat4依赖性Th1亲炎细胞因子如TNF- 、IFN- 和IL-12发挥负调节作用。Th1亲炎细胞因子具有强效抑制和杀伤癌细胞，促进癌细胞凋亡作用，尤其当多种亲炎细胞因子同时过量表达时，其协同抑癌作用更为明显。人类天然存在的Stat6null零活化表型与小鼠Stat-/-基因敲除表型有着类似的功能改变。在Stat6活化缺陷时（Stat6null），将降低或丧失对Stat4诱导的Th1亲炎细胞因子的负调节功能，从而使其过量表达，起到杀伤癌细胞的作用。在Stat6高活化时（Stat6high），上述负调节功能较强，Th1免疫反应相对不足，从而对癌细胞存活、生长和转移有利。因此，癌细胞本身的Stat6活化状态可以决定其生存命运和临床表现型差异，因而在癌变和癌进展中起着关键作用。 本项目的实施和完成，可以建立以Stat6活化表型为基础的人类癌细胞裸鼠活体移植模型，在理论上至少可部分解释由于Stat6活化状态及其Th1/Th2失衡所导致的癌细胞排斥与不排斥现象；研究并阐明SOCS-1和SHP-1CpG岛DNA甲酰化状态对Stat6活化表型的影响不但可以提供产生Stat6null的分子学基础，还可为癌症相关研究提供分子标记，从而加强其候选抑癌基因的地位。 Stat6信号传导通路的分子组成和活化 Stat（Signal transducer and activator of transcription, 信号传导和转录激活因子，简称Stat）为一类双功能分子，即参与信号传导，又激活基因转录。Stat 信号传导通路在多种细胞类型具有活性，主要调节细胞因子和激素依赖性基因表达，从而影响细胞发育、存活和凋亡。Stat家族目前已发现有7个成员，分别命名为Stat1、Stat2、Stat3、Stat4、Stat5A、Stat5B和Stat6［1,2］。其中Stat6已知可被细胞因子IL-4、IL-13、IL-15所激活，在多种细胞具有活性，包括免疫细胞和癌细胞［3,4］。 IL-4介导的Stat6活化为一系列链式反应，至少有6个分子参与，分别是IL-4、IL-4R 、 链（ c）、Janus激酶Jak1和Jak3以及Stat6（图1）。IL-4受体为杂源二聚体，IL-4R 具IL-4结合特异性而 c链则与其它细胞因子共享，如IL-2和IL-7［3］。IL-4与IL-4受体的结合激活与受体相联的Jak1和Jak3磷酸激酶，后者使IL-4R 胞浆区关键酪氨酸残基磷酸化，从而为潜能单体Stat6提供停靠点。Stat6分子的SH2（Src homology 2）功能区与IL-4R 停靠点结合，第641位酪氨酸随之被Jak3激酶磷酸化。磷酸化的Stat6随后形成同源二聚体并转入细胞核，与有关基因启动子高亲和力结合。依据宿主的病理生理状态，这种结合可激活或灭活有关基因的转录和表达［5］（图1）。 Stat6信号传导的调节 许多分子业已证实参与Stat6信号传导的调节［2,3,6］。SOCS-1（suppressor of cytokine signaling-1，细胞因子信号传导抑制蛋白-1）和SHP-1（SH2-containing phosphatase-1，含SH2磷酸酶）均含有SH2功能区，在Stat6信号传导中起负调节作用（图1）。SOCS-1可抑制Jak1和Jak3的酶活性以及阻止Stat6向IL-4R 停靠［7］。SOCS-1可能直接与Jak3激酶结合［8］以及促使蛋白体降解［6］来达到调节作用的。有趣的是，活化的Stat6可诱导SOCS-1转录表达，后者又反过来抑制Stat6进一步活化，从而形成一个负反馈环路对Stat6信号传导进行调节［7］（图1）。SOCS-1还可能调节IL-12介导的Stat4信号传导通路［9］ 。SHP-1是一种酪氨酸脱磷酸酶，能使Jak3分子上具催化功能的酪氨酸残基去磷酸化，从而抑制Jak3激酶活性［6］。 蛋白磷酸酶2A（PP2A）是一种全酶（holoenzyme），对多种蛋白的丝氨酸残基有去磷酸化作用，参与细胞信号传导和细胞周期的调节。近年来，PP2A已被显示在Stat6信号传导中起关键调节作用［10］。Stat6分子上的丝氨酸磷酸化能抑制Stat6活性，因此，PP2A通过其去丝氨酸磷酸化作用来正调节Stat6活性并增强Stat6二聚体的DNA结合能力（图1）。 此外，选择性剪接（alternative splicing）编码产生的突变Stat6分子，亦在Stat6活化中起重要调节作用。如Stat6