实验十 酵母核糖核酸的分离及组.pptVIP

实验十 酵母核糖核酸的提取及RNA的含量测定（苔黑酚法） 苔黑酚法测RNA的含量 1、标准曲线的绘制 混匀，沸水浴25—45min,冷却，测各管A670nm,以A670nm为纵坐标，RNA量（ug）为横坐标作图。 2、样品的测定 1.0ml样液+1.0ml蒸馏水+2.0ml苔黑酚试剂，混匀，沸水浴25—45min,测A670nm，根据标准曲线求得RNA的质量（ug）. * * 实验目的： 了解核酸的组分 掌握提取核酸和鉴定核酸组分的方法 掌握 苔黑酚法测定RNA含量的原理和方法。 实验原理： 酵母中RNA含量较多, 含量可达2.67～10.0%，DNA很少（0.03～0.516％），提取RNA以酵母最为理想。 RNA可溶于碱性溶液，研磨后离心去除沉淀（细胞碎片），当碱被中和后，上清液中加入乙醇可以使解聚的核糖核酸沉淀，离心弃上清液，可得到RNA的粗制品。 RNA versus DNA - Stability issues 一、核酸的水解 1. 碱水解 RNA的磷酯键易被碱水碱、DNA的磷酯键不易被碱水解。例如，在0.1 mol/L NaOH溶液中，RNA几乎可以完全水解，生成2′-或3′-磷酸核苷；DNA在同样条件下则不受影响。这种水解性能上的差别，与RNA核糖基上2′-OH的邻基参与作用有很大的关系。在RNA水解时，2