糖类等鉴定.ppt

实验2 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 观察DNA和RNA在细胞中的分布 植物必需无机盐的实验验证 （2009年山东理综）智能温室无土栽培作物，易于管理，优质高产。该项技术广泛应用于现代农业 * ★斐林试剂和双缩脲试剂的原理 反应现象 反应条件 添加顺序 蛋白质 可溶性还原糖 鉴定物质 成分 B液 A液 乙液 甲液 双缩脲试剂 斐林试剂 3.斐林试剂与双缩脲试剂比较 0.1g/mL NaOH溶液 0.05g/mL 溶液 0.1g/mL NaOH溶液 0.01g/mL 溶液 甲乙液等量混匀后立即使用 现配现用 先加入A液1mL,摇匀 再加入B液4滴,摇匀 （透明或白色） （紫色或紫红色） 水溶50℃~65℃加热 不需加热,摇匀即可 浅蓝色 棕色 砖红色 样液变紫色 斐林试剂中CuSO4溶液浓度为0.05 g·mL－1；双缩脲试剂中CuSO4溶液浓度为0.01 g·mL－1。 斐林试剂的实质是新配制的Cu(OH)2溶液，还原糖的醛基在加热条件下能将新制的Cu(OH)2中Cu2＋还原成Cu＋，从而生成砖红色的Cu2O沉淀；双缩脲试剂的实质是双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)在碱性溶液中能与Cu2＋结合生成紫色络合物，蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的肽键。 斐林试剂是先将NaOH溶液与CuSO4溶液混匀后再使用；双缩脲试剂是先加入NaOH溶液，再滴加CuSO4溶液。 (4)鉴定蛋白质时，向匀浆中加入1 mL双缩脲试剂A并摇匀，再加入3～4滴双缩脲试剂B并摇匀。其中双缩脲试剂B不能过量，因为过量的双缩脲试剂B会与试剂A反应，使溶液呈蓝色，从而掩盖掉生成的紫色。 (1)浓度不同。 (2)原理不同。 (3)使用方法不同。 考点访谈　 实验成功的关键在于实验材料的选择 (1)在还原糖的鉴定实验中，要求是： ①含还原糖高（ ） ②颜色 (2)在脂肪的鉴定实验中，要求 ①富含脂肪的种子 ②种子要比较大，利于徒手切片，如花生种子。 (3)在蛋白质的鉴定实验中， ①植物性材料：大豆（提前浸泡） ②动物性材料：鸡蛋的蛋清(需稀释)。 如果蛋白液稀释不够，与双缩脲试剂发生反应后会粘固在试管的内壁上，使反应不彻底，并且试管也不容易刷洗干净。 葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖 白色或者近于白色，一般选用苹果、梨等 ★对照原则 ★水浴加热 ★班氏试剂鉴定方法 还原糖检测实验的实验结果 ★两种方法鉴定：样液法或子叶切片法 ★50%的酒精的作用： ★两种染色剂的颜色不同，时间不同 洗掉浮色 脂肪检测实验的实验结果 ★留样液：对照 蛋白质检测实验的实验结果 观察DNA、RNA在细胞中的分布 1．实验原理： （1）甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色。利用甲基绿、吡罗红混合染色剂将细胞染色，可以显示DNA和RNA在细胞中的分布。 （2）盐酸能够改变细胞膜的通透性，加速染色剂进入细胞，同时使染色体中的DNA和蛋白质分离，有利于DNA与染色剂结合。 ★甲基绿吡罗红混合染剂，现配现用，呈紫红色 使观察效果最佳 先低倍镜观察，选择染色均匀、色泽浅的区域，移至视野中央，调节清晰后才换用高倍物镜观察 观察 使DNA和RNA着色 滴2滴吡罗红、甲基绿（混合）染色剂于载玻片上染色5min 染色 用蒸馏水的缓水流冲洗载玻片10s 冲洗 涂片 将烘干的载玻片放入质量分数为8%的盐酸溶液中，用30℃水浴保温5min 水解 防止污迹干扰观察效果； 消毒为防止感染，漱口避免取材失败；烘干固定装片 载玻片要洁净，滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻刮几下取细胞；将载玻片在酒精灯下烘干 取口腔上皮细胞制片 解释 注意问题 操作步骤 保持细胞原有形态 改变细胞膜的通透性，加速染色剂 进入细胞，促进染色体的DNA与 蛋白质分离而被染色 洗去残留在外的盐酸 3.实验现象和结论： RNA广泛分布于 中 绿色周围的红色范围较广 DNA主要分布于 中 绿色明显集中接近细胞中央 结论 现象 ★DNA主要分布于细胞核内，线粒体、叶绿体中也有少量DNA ★RNA主要分布于细胞质（ ）中，少量RNA也存在于细胞核的核仁和染色质等处