有关黄酒内维生素E和微量元素硒对小鼠体内.docVIP

实验题目实验原理, 蛋白质, 膜多聚不饱和脂肪酸发生超氧化反应, 产生有毒代谢中间产物, 引起组织氧化损伤。维生素E对氧敏感，易被氧化，故可保护其他易被氧化的物质，如不饱和脂肪酸，维生素A和ATP等。减少过氧化脂质的生成，保护机体细胞免受自由基的毒害，充分发挥被保护物质的特定生理功能。硒可以通过一系列含硒酶，使许多脂质过氧化物、过氧化氢等得到有效的清除体内有害自由基过剩, 且很不稳定,需要用生化方法检测标本中的丙二醛的含量， 了解体内自由基代谢情况，测定方法是丙二醛在高温及酸性环境下可与2-硫代巴比妥酸（TBA）反应产生红棕色的产物3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川），该物质在532nm处有一吸收高峰，并且在660nm处有较小光吸收。根据其532nm的消光值可计算出溶液中丙二醛的含量。通过计算黄酒经过消化道作用后机体丙二醛的含量，推断黄酒对机体内自由基的清除效果，判断其抗氧化能力的大小。 实验步骤4oC的生理盐水中洗去表面残血，用滤纸吸干，称量待测组织样品的重量，用锡箔纸包裹已测组织迅速放入到液氮里备用。 4·将称量的肺组织样品与预冷的，含有l50mmol／LKCl的50mmol／L基氨基三羟甲甲烷 Tris 一HC1缓冲液 pH 7．4 以2mg：100μl的比例混合，另取一离心管制作空白溶液，用于分光光度试验作对照，以下处理与有组织的离心管相同； 5·在低温（将试管至于盛有冰的烧杯中）下,将匀浆机转速调到最大，搅拌约40s，用匀浆机制成2％ 肺匀浆，配置体积约2ml；（打开水浴锅） 6·取肺匀浆lmL，加入2ml生理盐水置10mL具塞离心管中，用混匀器混匀后静置l0 min； 7·将混合匀浆置于离心机中， 离心l0min 3000r／min ； 8·取上清液2.5mL，加1.5mL0．67％硫代巴比妥酸 TBA 于离心管中，将离心管置于试管架上； 9·离心管盖子不拧紧，连同试管架一起放入水浴锅中，沸水浴加热10min，取下，在冷水中迅速冷却至室温；（提前开始加热） 10·离心5min 2000r／min ，取上清液，然后在721分光光度计532nm波长测定MDA—OD532光密度； 11·记录数据，整理实验仪器。 四·实验数据——各组三甲川的吸光光度值 A组 A1 A2 A3 A4 A5 A6 吸光度 B组 B1 B2 B3 B4 B5 B6 吸光度 C组 C1 C2 C3 C4 C5 C6 吸光度 D组 D1 D2 D3 D4 D5 D6 吸光度 E组 E1 E2 E3 E4 E5 E6 吸光度 五·对实验数据进行统计分析 ·单因素试验各处理重复数相等的方差分析 各个小鼠组织中MDA-OD532nm的值 总和 平均值 1 2 3 4 5 6 A B C D E 合计