细胞室考试2010-07-12.docVIP

PBS FBS CS HS 是什么 及其用途 进入细胞室工作的过程 存放物品标示及处理的相关规定 移液枪使用的步骤 注意事项 细胞培养无菌操作的要点 简述细胞冻存和复苏的原则及主要步骤 可以从哪些方面鉴别所培养细胞的质量及生长状态 培养细胞出现微生物污染时，如何判断和消除污染源 请解释何谓对数生长期细胞？如何判断 请依据细胞室管理制度及细胞培养技术规范，列举10项你认为在细胞室内应该受到处罚的不当行为 详细描述细胞室值日生职责 PBS FBS CS HS 是什么 及其用途 PBS：PBS在医学词汇中表示磷酸盐缓冲液，pH=7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸氢钠、磷酸二氢钠、氯化钠以及氯化钾。PBS缓冲液一般作为溶剂，起溶解保护试剂的作用，具体试剂一般也有不同的比例配方，在针对性上就有了更好的效果。A 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。 　B 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。 　C 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要地低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。 　D 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。 E 对培养中的细胞起到某些保护作用：有一些细胞，如内皮细胞、骨髓样细胞可以释放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。因为胰蛋白酶已经被广泛用于贴壁细胞的消化传代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保护细胞免受机械损伤，特别是在悬浮培养搅拌时，粘度起到重要作用。血清还含有一些微量元素和离子，他们在代谢解毒中起重要作用，如SeO3,硒等。肥皂洗手； . 穿好隔离衣放好拖鞋； 用75％酒精棉球擦净双手打开紫外灯、超净台各20-30分钟。在开紫外灯杀菌前，应确认无菌室无人后方可开紫外灯杀菌。实验后灭菌：用75％酒精（3‰新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。操作步骤： 一个完整的移液循环，包括：容量设定、枪头安装、预洗吸头、吸液、放液、卸去枪头等6个步骤。每一个步骤都有需要遵循的操作规范。 1. 容量设定 容量设定分两个步骤，粗调和细调。 粗调时通过旋转移液枪排放按钮将容量值较快速地调整至接近自己的预想值； 细调时将移液枪横置，靠近自己眼前，通过调节轮慢慢地将容量值调至预想值，从而避免视觉误差所造成的影响。 注意：当我们从大值调整到小值时，刚好就行；但从小值调整到大值时，就需要调大三分之一圈后再返回，这是因为计数枪里面有一定的空隙，需要弥补。 2. 吸头安装 通常我们采用旋转法进行吸头安装。具体步骤如下： 把移液枪套筒顶端插入吸头（无论是散装吸头还是盒装吸头都一样），在轻轻用力下压的同时，把手中的移液枪按逆时针方向旋转180度。 注意：切记用力不能过猛，更不能采取跺吸头的方法来进行安装，因为那样做会对移液枪造成不必要的损伤。 3. 预洗吸头 在安装了新的吸头或增大了容量值以后，应该把需要转移的液体吸取、排放两到三次，这样做是为了让吸头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使整个移液过程具有极高的重现性。 其次，在吸取有机溶剂或高挥发液体时，挥发性气体会在套筒室内形成负压，从而产生漏液的情况，这时就需要我们预洗四到六次，让套筒室内的气体达到饱和，负压就会自动消失。 4. 吸液 先将移液枪排放按钮按至第一停点，再将吸头垂直浸入液面，浸入的深度为：P2*、P10小于或等于1毫米，P20、P100、P200小于或等于2毫米，P1000小于或等于3毫米，P5 mL、P10 mL小于或等于4毫米（浸入过深的话，液压会对吸液的精确度产生一定的影响，当然，具体的浸入深度还应根据盛放液体的容枪大小灵活掌握），平稳松开按钮，切记不能过快。 *，P后面数值表示最大量程，如无特别说明则表示单位为μL。 5. 放液 放液时，吸头紧贴容枪壁，先将排放按钮按至第一停点，略作停顿以后，再按至第二停点，这样做可以确保吸头内无残留液体。如果这样操作还有残留液体存在的话，应该更换吸头。 6. 卸掉吸头 卸下的吸头放于废物缸中。 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面； 靠近酒精灯火焰操作； 器皿使用前必须过火灭菌；继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火； 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。细胞复苏的原则－快速融化 必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速