细菌培养常用溶液配制.docVIP

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细菌培养常用溶液配制

大肠杆菌的液体培养基 LB(Luria-Bertani)液体培养基: 配制每升培养基,应在950mL去离子水中加入: 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 用5mol/L NaOH (约0.2mL)调pH至7.0,用去离子水定容至1L。 在15 psi(1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20min。 注:1Mpa 145psi pounds per square inch 10.2kg/cm2 LB固体培养基: 在LB液体培养基中加入1.5%的琼脂粉,在15 psi高压下蒸汽灭菌20min,室温保存。 氨苄青霉素(Amp) 去离子水配成浓度为50mg/mL,0.22μm滤器过滤除菌,-20℃备用。 表达用LB液体培养基 配制20%葡萄糖,15psi灭菌20min,添加至LB液体培养基中,使终浓度为0.2%。 表达用LB固体培养基 待高压LB固体培养基温度降至50mL左右,取20%过滤灭菌的葡萄糖加入LB固体培养基中,终浓度为0.2%,加氨苄青霉素到100-120μg/mL浓度 溶菌酶存贮液(10mg/mL) 使用前用10mmol/L Tris-Cl(pH 8.0)即刻溶解溶菌酶,配制成10mg/mL浓度的贮存液。(确保Tris-Cl的pH是8.0,低于该值,溶菌酶不能有效工作。) 某一特定pH的0.05mol/L的Tris-Cl缓冲液配制 将50mL的0.1mol/L Tris碱溶液与下表所示相应体积的0.1mol/L的HCl混合,加水调整至100mL。(10mmol/L和100mmol/L的Tris溶液pH值会相差0.1pH单位,溶液浓度越大,则其pH值越高。) 所需pH值 所需0.1mol/L的HCl的体积(mL) 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 34.5 32.0 29.2 26.2 22.9 透析袋处理液(500mL) 1mM EDTA –Na 0.186g 2% NaHCO3 10g 定容至500mL 处理方法: 煮液煮沸10min 冲洗透析袋内外壁 置于dd水中煮沸10min 冲洗内外壁 放入新鲜dd水中于4℃保存。

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