第十二讲基因工程与细胞工程概览.doc

第十二讲 基因工程、细胞工程与胚胎工程 一．基础知识回顾 1．基因工程的基本工具 限制酶 DNA连接酶 载体 作用 切割目的基因和载体 拼接DNA片段，形成重组DNA分子 携带目的基因进入受体细胞 作用 部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 作用特 点(条件) (1)识别特定的核苷酸序列； (2)在特定位点上切割DNA分子 (1)E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端； (2)T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制； (2)有一个至多个限制酶切割位点； (3)具有特殊的标记基因 2．基因工程的操作程序 (1)目的基因的获取 ①从基因文库中获取。 ②利用PCR技术扩增：其实质是在体外对目的基因进行大量复制。 ③用化学方法人工合成 a．对于核苷酸序列已知的直接人工合成。 b．可通过反转录法获取，即mRNA逆转录酶,单链DNADNA聚合酶,双链DNA。 (2)基因表达载体的构建 ①基因表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因＋复制原点。 ②基因表达载体的构建方法 (3)将目的基因导入受体细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法等 显微注射技术 感受态细胞法(Ca2＋处理法) 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 (4)目的基因的检测与鉴定 类型