分子生物学：转录.pptVIP

第三章 生物信息的传递（上） ——从DNA到RNA RNA 除了某些RNA病毒之外，所有RNA分子都来自于DNA。基因组DNA通过一个被称为转录的过程把贮存在双链DNA分子中的遗传信息转换到与模板DNA链相互补的RNA单链上。 mRNA，编码了一个或多个蛋白质序列； tRNA，把mRNA上的遗传信息变为多肽中的氨基酸信息； rRNA，是合成蛋白质的工厂核糖体中的主要成份。 转录的直接产物被称为初始转录物 primary transcript 。它包含一条从启动子延伸到终止子含有原始的5`及3`端的RNA。 但初始转录物通常不稳定。在原核生物中，它或被迅速降解 对于mRNA ，或被剪接成为成熟产物 对于rRNA和tRNA 。而在真核生物中，它或被末端修饰 主要对于mRNA ，或被剪接成为成熟产物 对于所有RNA 。 关于基因表达的两个基本问题 RNA聚合酶如何找到DNA上的一个特异性启动子，而不和其它序列混淆？ 调控蛋白是如何与RNA聚合酶相互作用。从而增强或抑制转录的起始、延伸，或终止的？ 第一节 信使的发现 1955年Brachet用洋葱根尖和变形虫进行实验： 若加入RNA酶，则蛋白质合成就停止； 若再加入从酵母的RNA，又可合成蛋白质。 这表明什么？ 1956年E. Volkin和 L.Astrachan，用同位素脉冲—追踪标记，表明T2噬菌体新合成的RNA的碱基比和它的DNA碱基比相似，而和细菌的碱基比不同。由于T2感染细菌时注入的是DNA，而在细胞里合成的是RNA， 此表明什么？ 最令人信服的证据是Hall.B.D和Spiegeman,S的DNA-RNA的杂交实验。 将T2噬菌体感染E.coli后产生的RNA分离出来，分别与T2和E.coli的DNA进行分子杂交，结果这种RNA只能和T2的DNA形成“ 杂种”链，而不能和E.coli的DNA进行杂交。 Jacob和Monod预言: （1）这种“ 信使”应是一个多核苷酸； （2）其分子平均不小于5?105bp,足以携带一个基因的遗传信息； （3）它们至少是暂时连在核糖体上； （4）其碱基组成反映了DNA的序列； （5）它们能高速更新。 Jacob和Monod将它定名为:信使RNA（Messenger RNA）或mRNA。 第二节 RNA的酶促合成 一. RNA合成的基本特点 1960年Weiss,S,B等发现RNA聚合酶（RNA Pol）。 其特点是： （1）以核糖核苷三磷酸（rNTR）为底物； （2）以DNA为模板； （3）按5′-3′方向合成； （4）无需引物的存在能单独起始链的合成； （5）第一个引入的rNTP是以三磷酸形式存在； （6）在体内DNA双链中仅一条链作为模板； （7）RNA的序列和模板是互补的。 E.coli在 0?C时需13秒钟才能加上一个核苷酸，但在37?C每秒就可加上40个核苷酸;利用这个差别以14C来标记U,在0?C培养E.coli。 提取这种正在伸长的mRNA分子，发现14C标记首先出现在伸长的3′端，因此可以证明合成是延着5′-3′方向进行的。 RNA合成和DNA复制的区别 （1）转录时只有一条DNA链为模板，而复制时两条链都可作为模板； （2）DNA-RNA杂合双链不稳定，RNA合成后释放，而DNA复制叉形成后一直打开，新链和母成子链； （3）RNA合成不需引物，而DNA复制需引物； （4 转录的底物是rNTP，复制的底物是dNTP； （5）聚合酶系不同。 二 转录的基本过程 模板识别 Template recognition 起始 Initiation ： 流产起始（abortive initiation） 在延伸 Elongation 阶段。 终止 Termination 第三节 细菌基因的转录 在细菌中一种RNA聚合酶负责所有mRNA、rRNA和tRNA的合成。一个E. coli细胞中约有7000 个RNA聚合酶分子。 它们中许多都参与转录；任意时刻大概有2000~5000 酶在合成RNA 此数字因细菌的生长状态而异 。 原核生物转录的起始延伸 （一）启动子（promoter）的结构和转录起始 1 结构典型,都含识别（R ,结合（B 和起始（I）位点; 2 序列保守; 3 位置和距离都比较恒定； 4 直接和多聚酶相结合； 5 常和操纵子相邻； 6 位于基因的5′端； 7 决定转录的启动和方向。 典型启动子的结构 -10序列是由Pribnow和Schaller（1975）发现，故也称为Pribnow框盒（Pribnow box）。 保守序列为T80A95T45A60A50T96 位于-10bp左右，A.T较丰富，易于解链。其功能是: 1 RNA pol紧密结合; 2 形