章10-复制.pptVIP

生物化学与分子生物学 Biochemistry and Molecular Biology 李 冲 东201，lichong2006@ 徐州医学院 生命是什么？ 蛋白质，核酸，酶（维生素和辅酶） 糖代谢，脂代谢，氨基酸代谢， 核苷酸代谢，血红素代谢 分子生物学，细胞信号转导 遗传信息的传递 基因概念的提出 1858年，Mendel提出遗传因子决定生物性状 1909年，Johansen提出基因 1926年，Morgan发表《基因论》 中心法则的建立 1944年，Avery等证明“遗传物质是DNA ” 1953年，Watson和Crick提出DNA双螺旋结构学说 1958年，Crick提出“中心法则” 1970年，Temin发现反转录酶，丰富了中心法则 分子生物学的发展 1973年，重组DNA技术 1975-1977，DNA测序技术 1977年，重组基因的表达 1985年，聚合酶链式反应(PCR) 80’-90’，转基因动物、转基因植物 1991年，基因治疗 1996年，克隆羊多莉 1998年，RNA干扰(RNAi) 1990-2003，人类基因组计划 “中心法则” 第 10 章DNA 的 生 物 合 成 -- 复 制Biosynthesis of DNA -- Replication 第一节 DNA 复制概述 第二节 DNA 复制的酶学 第三节 原核生物的DNA 复制 第四节 真核生物的DNA 复制 第五节 DNA损伤与修复 第六节 RNA 指导DNA的合成 第一节 DNA 复制概述 什么是DNA复制？ 以DNA为模板，按碱基配对原则，合成新的DNA，并使遗传信息从亲代传递给子代的过程，称为复制(replication ) 。是一种DNA指导下的DNA合成。 1，DNA复制的化学反应 dNTP通过磷酸二酯键相连 合成的方向，5’?3’ 2，DNA复制是半保留复制(semi-conservative replication) DNA在复制时，子代的DNA双链中一股单链是从亲代完整地接受过来的，另一股单链完全重新合成，由于碱基互补，两个子代的DNA双链和亲代DNA碱基序列一致。 半保留(semi-conservative),全保留(conservative), 混合式(dispersive) Meselson-Stahl实验证明半保留复制 3，DNA复制是半不连续复制(Semi-discontinuous replication)：DNA复制时，一条链的复制是连续的，另一条链的复制是不连续的。 前导链(Leading strand) 复制沿５’→3’ 顺着解链方向延长，复制过程连续的， 随后链或随从链（lagging strand） 另一条链的复制方向与解链方向相反，是不连续的。 半不连续复制的证据 冈崎片断(Okazaki fragments ) 随从链合成的不连续的小分子量的DNA片段。 在大肠杆菌复制过程中发现1000-2000 bp(真核生物生物中100-200 bp)的DNA片断，且可以连接成高分子DNA。 第二节 DNA复制的酶学 1，解螺旋酶(helicase) 作用：将DNA双螺旋解开 又名：Rep蛋白，DnaB蛋白 DnaA蛋白：辨认复制起始点 DnaC蛋白：辅助DnaB在起始点上结合并打开双链 2，拓扑异构酶(topoisomerase) 作用：松弛DNA超螺旋结构 既能水解，又能连接磷酸二酯键 拓扑酶Ⅰ 切断DNA双链中的一股 拓扑酶Ⅱ 切断DNA双链 3，单链DNA结合蛋白(SSB, single-strand binding protein) 维持模板处于单链状态 保护单链的完整 4，引物酶(primase) 一种RNA聚合酶，以DNA为 模板，合成一段短的RNA分子 （引物，primer），提供3’-OH 使新DNA链合成。 引发体（primosome）： Dna A辨认复制启始点，再结合Dna B, Dna C及其他复制因子，和引物酶一起形成复合体，DNA复制准备就绪。新的DNA链在DNA聚合酶的催化下生成。 5，DNA聚合酶(DNA polymerase) 催化磷酸二酯键形成,按碱基互补原则沿5’?3’方向延长新链 复制的保真性 1. 遵守严格的碱基配对规律 2. 聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能 3. 复制出错时的校读功能 复制的保真性与DNA聚合酶的三种酶功能 5’?3’聚合酶活性 3’?5’外切酶活性： 识别、切除错配的碱基 5’?3’外切酶活性