第十一章细胞增殖及其调控(6学时)分解.pptVIP

第十一章 细胞增殖及其调控 细胞增殖(cell proliferation)的意义 ◆ 细胞增殖(cell proliferation)是细胞生命活动的重要特征之一,是生物繁育的基础。 ▲ 单细胞生物细胞增殖导致生物个体数量的增加。 ▲ 多细胞生物由一个单细胞(受精卵)分裂发育而来, 细胞增殖是多细胞生物繁殖基础。 ◆ 成体生物仍然需要细胞增殖，主要取代衰老死亡的细胞，维持个体细胞数量的相对平衡和机体的正常功能。 ◆ 机体创伤愈合、组织再生、病理组织修复等，都要 依赖细胞增殖。 第一节 细胞周期与细胞分裂 ● 细胞周期(cell cycle)概述 ● 有丝分裂(mitosis) ● 减数分裂(Meiosis) 一、细胞周期(cell cycle)概述 ●细胞周期 ●细胞周期中各个不同时相及其主要事件 ●细胞周期长短测定 ●细胞周期同步化 ●特异的细胞周期 1.细胞周期 ◆概念：细胞从一次分裂结束开始，经过物质积累过程，到下一次细胞分裂完成所经历的一个有序过程。 1.1 细胞周期时相组成 ·间期(interphase): G1 phase，S phase，G2 phase ·M phase: 有丝分裂期(Mitosis),减数分裂(Meiosis) 细胞沿着G1→S→G2→M→G1周期性运转，在间期细胞体积增大(生长)，在M期细胞先是核分裂，接着胞质分裂，完成一个细胞周期。 1.2 细胞周期时间 ·不同细胞的细胞周期时间差异很大 ·S+G2+M 的时间变化较小，细胞周 期时间长短主要差别在G1期 ·有些分裂增殖的细胞缺乏G1、G2期 1.3 根据增殖状况，细胞分三类 1 连续分裂细胞(cycling cell)（周期中细胞） 能够持续进行分裂的细胞。如：表皮生发层细胞，部分骨髓细胞 2 休眠细胞(Go期细胞)（静止期细胞） 暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，去执行一定的生物学功能，当得到信号指使，会快速返回细胞周期，重新进行分裂的细胞。如：淋巴细胞，肝细胞，肾细胞 3 终末分化细胞 细胞分化程度很高，一旦生成后终生不再分裂的细胞。如：神经细胞，肌肉细胞 2.细胞周期中不同时相及其主要事件 ◆ G1期 ◆ S 期 ◆ G2期 ◆ M 期 2.1 G1期 G1期主要事件：开始合成细胞生长所需要的多种蛋白质、RNA、碳水化合物、脂等，同时染色质去凝集。 G1晚期与DNA合成启动相关。 限制点（检验点）：检验点是作用于细胞周期转换的调控通路，保证细胞周期中的关键事件高度准确的完成。（监控机制） G1/S期检验点（外因、内因）： 细胞外环境是否适宜？DNA是否损伤？细胞体积是否足够大？ 2.2 S期 · DNA复制，组蛋白合成，复制所需酶类合成 · DNA复制与组蛋白合成同步，组成核小体串珠结构 · S检验点：DNA是否复制完全？ 2.3 G2期 · DNA复制完成，在G2期合成细胞分裂相关的蛋白质和RNA分子，完成进入M期的必要准备。 · G2期检验点：检查DNA是否完成复制？损伤是否修复？细胞是否生长的合适大小，环境因素是否有利？ 2.4 M 期 · 细胞分裂期，细胞染色质凝集，遗传物质和细胞内其他物质分配给子细胞，细胞一分为二 ·分裂方式包括三种方式，即无丝分裂(Amitosis)；有丝分裂(mitosis)和减数分裂(meiosis)。 中期/后期检验点：纺锤丝是否捕获了染色体 3.细胞周期长短测定 ◆脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法（标记有丝分裂百分数法，PLM） PLM:被标记的分裂细胞占所有分裂细胞的百分比 3.细胞周期长短测定 ◆脉冲标记DNA复制和细胞分裂指数观察测定法 ◆流式细胞仪测定法(Flow Cytometry) G1: 1N ; G2/M：2N ; S: 介于1N和2N之间 监测DAN含量的变化 4.细胞周期同步化 ◆自然同步化 ◆人工同步化 · 人工选择同步化 · 药物诱导法 人工选择同步化 · 有丝分裂选择法：用于单层贴壁生长细胞。优点是细 胞未经任何药物处理，细胞同步化效率高。缺点是 分离的细胞数量少。 · 密度梯度离心法：根据不同时期的细胞在体积和重量 上存在差别进行分离。优点是方法简单省时，效率高， 成本低。缺点是对大多数种类的细胞并不适用。 药物诱导法 · DNA合成阻断法 ─ G1/S-TdR双阻断法：最终将细胞群阻断于G1/S交界处。优点是同步化效率高，几乎适合于所有体外培养的细胞体系。缺点是诱导过程可造成细胞非均衡生长（过量的TdR和羟基脲） ·