简便快速的PCR绪论.pptVIP

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  • 2016-10-01 发布于湖北
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简便快速的PCR技术 依赖核酸序列的扩增技术 (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification;NASBA) 反应体系: 缓冲溶液 AMV逆转录酶 T7 RNA聚合酶 RNase H 引物(下游引物5端带有T7RNA聚合酶启动子序列)。 依赖核酸序列的扩增技术 (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification;NASBA) 原理: 靶RNA经AMV逆转录,形成RNA:DNA杂交体 RNase H降解杂交体的RNA,剩下单链DNA AMV以其为模板,合成含T7RNA聚合酶启动子的双链DNA T7RNA聚合酶以其不断转录出靶RNA 进入新一轮扩增循环 产物主要为反义单链RNA、RNA:DNA杂交体和双链DNA。 依赖核酸序列的扩增技术 (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification;NASBA) 特点: 可直接扩增特异性单链RNA 整个反应不需PCR仪,无需温度循环,没有高温变性步骤,不会受到外来双链DNA的污染。 反应速度快,忠实性好,特异性强,敏感性高。 加入变性步骤, 也能扩增双链DNA。 环介导等温扩增技术 (loop一mediated isothermal amplification,L

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