第12专题分子生物学技术在昆虫分类学中发展剖析.ppt

8. DNA 条码技术 DNA barcoding 9. 探针杂交技术 Probe 探针 核酸分子杂交即具有一定同源性的DNA单链分子或DNA单链分子与RNA分子，其互补的区段在去掉变性条件后能够复性形成双链DNA分子或DNA／RNA异质双链分子。 核酸的分子杂交技术有不同的形式和方法，包括Southern分子杂交技术、Northern分子杂交技术和原位杂交技术。 应用核酸分子杂交技术检测昆虫的遗传多态性、DNA同源性及mRNA 的差异，进行昆虫近缘种和地理种群鉴别是当前昆虫系统学研究中常用的分子生物技术。 如Conins(1987)用DNA探针杂交鉴定按蚊属近缘种类。 牛玲玲(1992 )将DNA探针用于中华按蚊和嗜人按蚊的分类研究。 可以预见，未来对重要农、林、医学昆虫基因文库或cDNA文库中的目的基因可以利用核酸分子杂交技术来筛选获得。 10. 生物芯片技术 Bio-chip Gene-chip基因芯片 Mirco-array 寡核苷酸微阵列 组织芯片 江西农业大学农学院植保系 王建国 2013-11-03 分子生物学技术在昆虫分类学中的运用 唐觉教授对日本臭蚁的鉴定 蚂蚁分类专家—浙江大学唐觉教授 来源：/newscenter/2007-06/23/contenthtm 新技术在分类学上的运用 几乎每一次生物技术方法的进步都会被引入到昆虫的分类中来. 1电子显微镜和扫描电镜带来了超微形态学 形态上可解决一些近似种的分类 2血清学反应方法,同功酶分析 3 层析法电泳法 4 蛋白质和氨基酸分析方法, 5核酸的研究 RAPD,RFLP,分子系统发育分析 6数值分类法 新的统计分析软件使分类进入数理统计水平 传统形态分类技术和新技术的发展使分类工作进入一个高速发展的时代. 传统形态分类与现代分类技术的关系。 DNA技术在昆虫分类中的运用(见另章节) 红火蚁标本实体,粘在三角纸上的干标本 一种蚂蚁的电子扫描图象 新技术在分类学上的运用(二) 红火蚁的头部，示唇基中央齿 热带火蚁的头部，无唇基中央齿 入侵红火蚁的尾部蜇针 高清晰显微镜的运用 图 1 图 2 图 3 电泳图 辣椒实蝇 28号样品 30号样品 Hex：核酸固定阳性对照； CK+：实验阳性对照，为酵母Y5基因； CK-：实验阴性对照，探针为水溶液。 辣椒实蝇28号，30号样品理论杂交模式图 Probe CK+ CK- CK+ Hex Hex 辣椒实蝇28号，30号样品实际杂交图 DNA模型 目前，已经定名的昆虫有100多万种，占已知动物的2／3，但是全世界仍约有9o％的昆虫是未知种。 随着科学技术的进步以及各个学科的交叉渗透，已有200多年历史的昆虫分类学也获得了极大的发展。 常用的昆虫分类技术 一、形态学分类法（分支--数值分类法） 二、行为学方法（系统生物学） 三、遗传学方法 四、生化分类方法（酯酶、同工酶等） 五、分子生物学方法 一、形态学分类法 形态学分类法是传统的昆虫分类方法中最基础的方法。该方法主要是根据形态结构与功能相一致的原理。以昆虫的外部形态．内部结构及各部分大小比例等特征为依据，对昆虫进行分类鉴别。目前，昆虫分类系统主要采用的形态学依据有：昆虫的颜色和斑纹；翅的有无、性质以及翅脉脉相：口器的类型及其在个体发育中的变化；触角类型及节数：身体附属物类型及其大小；马氏管的数目；生殖器官及其他结构部位的形态特征。同时，昆虫的变态类型、生活史、宿主范围及地理分布都是重要的参考依据。 但是传统的形态学方法有不少的局限，例如一些昆虫的形态特征不稳定、同种异型和异种同型现象、近缘种，形态结构十分相似等问题。 扫描电子显微镜 热带火蚁 Solenopsis geminata 电子显微镜 电子显微镜和扫描电子显微镜的问世，使昆虫的形态学分类达到了超微结构水平。 五、分子生物学方法 目前，应用于昆虫系统演化及分类鉴定方面的分子生物学技术主要有：RAPD技术、RFLP方法、DNA序列分析、分子杂交技术，SSCP方法及DSCP技术等。 PCR技术 聚合酶链式反应技术 PCR Polymerase chain reaction 1985年，Kerry Mullis发明了DNA聚合酶链式反应PCR(Polymerase chain reaction)技术，目前这一技术在分子生物学领域获得了广泛的应用，已经在很大程度上代替了传统的DNA克隆方法。 利用PCR技术能够从复杂的DNA分子群体中选择性地复制一段特异的DNA序列，从而使某一DNA片段得到特异性的扩增；同时这一技术在昆虫学领域也得到了广泛的应用。 PCR技术常与RAP