微生物限度检查法验证方案2013重点.doc

文件编号： 验证文件 微生物限度 检查法验证方案 有限责任公司 目 录 适用范围 目的 概述 验证所需要的仪器设备及文件 可接受的限度范围标准 测试方法 异常情况处理 测试结果 结论 再验证周期 11附表 1适用范围 本验证方案适用于******微生物限度检查法的验证。 2目的 建立该产品的微生物限度检查方法，并对其有效性进行评价，确保试验方法的完整性，保证检验结果的可靠性。 3概述 3.1******处方中含有XXXX以及常用辅料等成分，文献报道XXXX有抑菌活性。根据以上特点，按《中国药典》2010年版附录Ⅺ J《微生物限度检查法方法》的“供试品的制备”项下需用特殊方法制备供试液中（6）制备供试液。“细菌，霉菌，酵母菌计数”项下检查法2薄膜过滤法进行细菌，霉菌及酵母菌的计数方法验证，控制菌检查项下控制菌的检查法验证。 3.2验证时间：************批平行三次试验。 4验证所需要的仪器设备及文件 4.1验证需用仪器设备 器具名称 规格型号 检定日期 检定单位 有效期 电热恒温培养箱 HG101-3 多用生化培养箱 SP-80 蒸汽灭菌器 ZDX-35B 4.2验证所需要的文件及存放地方 资料名称 存放地点 《HG101-3电热恒温培养箱操作维护保养SOP》 《SP-80型生化培养箱操作维护保养SOP》 《ZDX-35B蒸汽灭菌器操作维护保养SOP》 《微生物限度检查法SOP》 5可接受的限度范围标准 5.1******微生物限度检查质量标准 项目 标准规定 细菌总数 ≤1000个/g 霉菌、酵母菌 ≤100个/g 大肠埃希菌 不得检出 5.2细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证结果判断 在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不低于70%。若试验组的菌回收率均不低于70%，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的细菌、霉菌及酵母菌；若任一次试验中实验组的菌回收率低于70%，应采用其他方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行方法验证。 5.3控制菌检查方法验证结果判断 若试验组检出试验菌（检出试验菌判断如下），按此供试液制备法和控制菌检查法进行供试品的该控制菌检查；若试验组未检出试验菌，应采用其他方法消除供试品的抑菌活性，并重新进行验证。 5.4大肠埃希菌检查结果判断 如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯培养基的平板上，培养18～24h。琼脂判供试品检出大肠埃希菌； 若平板上无菌落生长、或生长的菌落与下表所列的菌落形态特征不符，判定供试品未检出大肠埃希菌。若平板上生长的菌落与下表所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的生化试验，确认是否为大肠埃希菌。 培养基 菌落形态 曙红亚甲蓝琼脂 紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽 麦康凯琼脂 鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润 6测试方法 6.1供试品 ******，批号(******)。 6.2培养基及菌种 6.2.1采用符合中国药典规定的干燥培养基，中国药品生物制品检定所制。 6.2.2枯草芽孢杆菌CMCC(B) 63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B) 26003、大肠埃希菌CMCC（B）44102、白色念珠菌CMCC (F) 98001、 黑曲霉CMCC(F)98003。 6.3菌液制备 6.3.1细菌、霉菌及酵母菌的检查的菌液制备 6.3.1.1取新鲜的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基中，经32.5℃±2.5℃培养18～24h，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。 6.3.1.2取新鲜的白色念珠菌的培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，经25.5℃±2.5℃培养24～48h，用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～100cfu的菌悬液，做活菌计数备用。 6.3.1.3取新鲜的黑曲霉培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基，经25.5℃±2.5℃培养5～7d，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将霉菌孢子洗脱。然后吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细吸管）至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）