2实验室设备培养基无菌操作解说.pptVIP

2. 细胞工程的基本设备 和无菌操作 第一节 基本设备 一、实验室的组成 实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的，实验室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养实验室时，应按组织培养程序来设计，避免某些环节倒排，引起日后工作混乱。 植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 标准组织培养室包括 洗涤室（区） 制备室（区） 灭菌室（区） 储放室（区） 操作室（区） 培养室（区） 观察室（区） 药品室（区） 实验室设计原则： 保证无菌操作，达到工作方便，防止污染 １、洗涤室 玻璃器皿和塑料器皿 １、洗涤　包括用自来水、洗液、洗涤剂清洗 ２、烘干　包括自然晾干和烘箱干燥 洗涤室用于完成玻璃器皿等仪器的清洗、干燥和贮存。室内应配备大型水槽，最好是白瓷水槽。为防止碰坏玻璃器皿，可铺垫橡胶。上下水道要畅通。备有塑料筐，用于运输培养器皿。备有干燥架，用于放置干燥涮净的培养器皿。 ２、药品室 存放常用的化学试剂 无机盐类、有机物、生长调节剂等 ３、制备室 培养基的配制 生理生化测定 ４、储存室（区） 存放配制后的培养基 或未用完的培养基 ５、灭菌室 即消毒室，是培养基、玻璃器皿、塑料器皿和其他物品消毒灭菌的地方 ６、操作室 也称接种室，用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序 要求：干爽安静，清洁明亮。墙壁光滑平整不易积污灰尘，地面平坦无缝便于清洗和灭菌。 接种室宜小不宜大，一般7～8平米，要求地面、天花板及四壁尽可能密闭光滑，易于清洁和消毒。配置拉动门，以减少开关门时的空气扰动。在适当位置吊装1～2盏紫外线灭菌灯，用以照射灭菌。最好安装一小型空调。 接种室应设有缓冲间，面积1m2为宜。进入无菌操作室前在此更衣换鞋，以减少进出时带入杂菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯。 ７、培养室 接种到培养瓶等器皿中的植物材料培养的场所。 培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目、及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。 培养材料放在培养架上培养。培养架大多由金属制成，一般设5层，最低一层离地高约10cm，其他每层间隔30cm左右，培养架高1.7m左右。长度根据日光灯的长度而设计， 培养室最重要的因子是温度，一般20—27℃左右， 室内湿度也要求恒定，相对湿度在70%～80%为好， 控制光照时间可安装定时开关钟，一般需要每天光照10-16h，现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，可节省能源，且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。 驯化室 植物组织培养材料移到田间前，先移到驯化室进行练苗，待生根成活后，再移到田间苗圃。 二、基本设备 １、烘箱 洗涤室 作用： 干燥洗净的器皿 　　　高温干热灭菌 　　　测定培养物的干重　 　　　气浴 ２、冰箱 制备室 作用：低温保存材料，存放药品、 培养基母液、激素、酶制剂。 超低温冰箱： ３、灭菌锅 灭菌室 类型：普通医用消毒锅 　　　大的高压灭菌锅 作用：培养基、水和各种器皿的消毒 ４、超净工作台 操作室（接种室） 类型：垂直式和水平式 作用：无菌操作平台 6、显微镜 观察室 类型： 倒置显微镜 原生质体观察 普通显微镜 染色体和叶片气孔观察 荧光显微镜 细胞活力观察 解剖显微镜 立体观察 7、天平 制备室 作用： 称取大量元素、微量元素、酶制剂 8、玻璃器皿 需大量的玻璃器皿。要求由碱性溶解度小的硬质玻璃制成，以保证长期贮存药品及培养的效果；透光度好，能耐高压高温，能方便放人培养基和培养材料的器皿。 培养用的：试管、三角瓶、培养皿等 显微镜下观察用的：细胞微室、载玻片、培养皿等 最常使用的是三角瓶，规格有lOOml，250ml，500ml等，一般使用100ml三角瓶，无论静止或振荡培养皆适用。其培养面积大，利于组织生长，受光也比试管好。由于瓶口较小，亦不易污染。 培养皿：要求上、下能密切吻合。在游离细胞、原生质体、花粉等的静置培养、看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等都需采用。 试管：18mmX180mm或20mmX200mm规格。可用于培养较高的试管苗，另外也不易污染。 培养器皿还可就地取材，采用一些代用品。广口的200ml罐头瓶：加盖半透明的塑料盖，瓶口大，大量繁殖时操作方便、工作效率高，也减少了培养材料的损伤。缺点：易引起污染。 瓶口封塞：一定的通气性和密闭性，以防止培养