第6章色谱法剖析.pptVIP

第六章 色谱法 考试要点 1.常用的固定相2.薄层板的制备3.点样、展开、检视的方法和要求 4.色谱系统适用性试验 5.应用 TLC HPLC 1.常用术语 2.仪器的基本结构3.检测器的类型和适用范围 4.分离机理5.常用的固定相和流动相 6.正相色谱法和反相色谱法7.色谱系统适用性试验 8.应用 GC 1.仪器的基本结构2.进样方式、检测器的类型和适用范围3.常用的流动相、固定相和载体 4.色谱系统适用性试验 5.应用 电泳法 1.常用术语 2.各类电泳方法 3.毛细管电泳法 第六章 色谱法 赛跑 分配系数：平衡时组分在固定相和流动相的浓度之比。 ∴分配系数大的组分出峰晚 术语 容量因子：分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。 与组分、固定相、流动相、温度、两相的体积有关 专属性强，适用于复杂成分 色谱分类 1.按分离原理 吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 分子排阻色谱 TLC、HPLC、GC HPLC、GC 离子型化合物 流动相为水或含有机溶剂的缓冲盐 β-内酰胺类抗生素中高分子杂质的检查一般用SephadexG-10凝胶系统检查 根据分子大小进行分离的技术 分离原理为凝胶色谱柱的分子筛机制 2.按操作形式 平面色谱、柱色谱及电泳法 3.按两相物态 GC、HPLC 一、TLC 1.制板 2.活化 3.点样与展开 4.检视 紫外灯 显色剂 专属性强，操作繁琐，重现性差 常用硅胶、氧化铝、聚酰胺为固定相 105℃-110 ℃加热30min使硅胶吸附力增强 主要有吸附、分配和分子排阻的原理；常用吸附TLC 硅胶中G表示含黏合剂煅石膏；H表示无黏合剂；F254表示紫外灯下显荧光 1份固定相∶3份水 圆点，点样基线距底边2.0cm；样点直径2～4mm；点间距离为1.0～2.0cm 浸入展开剂的深度距底边0.5～1.0cm；展距20cm的板为10～15cm，10cm的板为5cm TLC系统适用性试验 1.灵敏度 2.比移值 3.分离效能 稀释的对照品做 0.2-0.8，最佳0.3-0.5 斑点至基线的距离 展开剂前沿至基线的距离 两斑点间的距离 斑点的宽度 作用 1.鉴别 2.检查 绝大多数杂质检查用，但2010版很多改为HPLC （1）杂质对照品法 （2）自身稀释对照法 二、HPLC t0 tR 峰高或峰面积定量 峰位定性 峰宽衡量柱效 死时间 保留时间 基线 HPLC的分类 分配色谱 吸附色谱 离子交换色谱 分子排阻色谱 化学键合相色谱 根据待测组分的分子大小进行分离 凝胶色谱 相对分子质量﹥1000 1.仪器结构 高压输液泵 检测器 色谱柱 进样阀 工作站或数据处理系统 检测器的类型 （1）紫外检测器 最常用 灵敏度高、重复性好、线性范围宽 对温度和速度不敏感 适用于有共轭结构的化合物 （2）光二极管阵列检测器DAD 可同时提供光谱图、色谱图 峰纯度分析 （3）荧光检测器 （4）电化学检测器 （5）质谱检测器 主要用于大分子物质的检测 选择性检测器 检测器的类型 通用型检测器 （6）示差检测器 （7）蒸发光散射检测器 对温度敏感 对糖类灵敏度高，其余低 雾化 检测 蒸发 流动相不能含盐 2.分配色谱 （1）正相色谱 （2）反相色谱 流动相极性﹤固定相极性 流动相极性﹥固定相极性 适用于极性及中性的物质 适用于非极性及中性的物质 极性 范围 常用固定相 流动相 ODS（十八烷基硅烷键合硅胶） 氨基或氰基硅烷键合相 色谱甲醇、乙腈、四氢呋喃 烃类+三氯甲烷或醇类 分离机制 范德华力或氢键 疏水理论 溶质的保留是靠溶质分子与极性溶剂分子之间的排斥力 流动相极性增强，溶质的保留增强，洗脱能力降低，保留时间增大。 分离极性相近的物质时，极性大的组分先出。 （3）离子对反相色谱法 （4）离子抑制色谱法 流动相中加入物质 适用范围 离子对试剂 弱酸、弱碱或缓冲盐 极性较大的有机酸、碱、盐等离子化合物 弱酸、弱碱的分离 3.色谱系统适用性试验 （1）理论板数 （2）分离度 （3）重复性 （4）拖尾因子 ﹥1.5 对照品做 RSD≤2.0% 峰高法定量时0.95-1.05 4.应用 （1）保留时间鉴别 （2）检查 （3）含量测定 多用外标法 内标法加校正因子法 外标法 加校正因子的主成分自身对照法 不加校正因子的主成分自身对照法 面积归一化法 内标法加校正因子法 供试品中无，保留时间与待测组分接近，完全分离，纯度高 三、GC 适用于挥发性成分 1.仪器结构 气源 进样方式 直接进样和顶空进样 色谱柱 柱温箱 检测器 工作站或数据处理系统 检 测 器 火焰离子化检测器FID 氮磷检测器 火焰光度检测器 电子捕获检测器 质谱检测器 热导检测器 碳氢化合物 含N、P元素的化合物 含S、P元素的化合物