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基因工程与转基因的安全性和生物武器 1．如图是某种动物蛋白质工程的示意图，请分析回答： (1)目前蛋白质工程中难度最大的是图中编号________所示的过程，实现③过程的依据有________________________________________________________________________ ______________________________________________________________。 (2)若相关蛋白质的核酸片段是从细胞质获取的，则④过程包括________、________。 (3)⑤过程中对核苷酸序列有严格要求的工具酶是______，进行⑤过程的目的是________________________________________________________________________。 (4)为获得较多的受精卵用于研究，⑥过程的处理方案是________________。若⑥过程所得的卵母细胞是从卵巢中获得的，则体外受精前的⑧过程表示________________________________________。2．基因工程又叫基因拼接技术。 (1)在该技术中，用人工合成方法获得目的基因的途径之一是：以目的基因转录的______________为模板，______________成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成______________。 (2)基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、________。 (3)假设以大肠杆菌质粒作为运载体，并以同一种限制性内切酶切割运载体与目的基因，将切割后的运载体与目的基因片段混合，并加入DNA连接酶。连接产物至少有________种环状DNA分子，它们分别是________________________________________________________________。把重组质粒导入细菌细胞时一般用________处理以增加细菌细胞壁的通透性。 (4)假如把抗虫基因导入棉花的一个叶肉细胞中，为了避免造成基因污染你认为应该把目的基因连接在________(“核基因”或“质基因”)中。 3．2008年诺贝尔化学奖授予了三位在研究绿色荧光蛋白(GFP)方面做出突出贡献的科学家。绿色荧光蛋白能在蓝光或紫外光的激发下发出绿色荧光，这样借助GFP发出的荧光就可以跟踪蛋白质在细胞内部的移动情况，帮助推断蛋白质的功能。已知GFP基因最初从发光水母中提取出来。GFP基因可作为目的基因用于培育绿色荧光小鼠，下图表示培育绿色荧光小鼠的基本流程，请分析回答： (1)用于培育绿色荧光小鼠的基因表达载体的组成必须有启动子、________和__________。图中①过程需要的工具酶有____________和____________；过程②常用的方法是________________________________________________________________________；过程③利用的生物技术是________；在进行过程④前，利用________技术可以获得数目更多且基因型相同的绿色荧光小鼠。 (2)水母的GFP基因之所以能“嫁接”到小鼠染色体的DNA上，其原因是________________________________________________________________________。GFP基因进入小鼠受精卵内，且能在其内维持稳定和表达的过程称为________。 (3)GFP基因有时还可与其他目的基因一起构建到载体上，不影响目的基因的表达，且对细胞无毒害作用，因此GFP基因可以作为基因表达载体上的________。 (4)目前科学家们通过________工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程是直接改造GFP分子，还是改造GFP基因？________________。 4．降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科研机构为了研发一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如图。 在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：(1)Klenow酶是一种____________酶，合成的双链DNA有________个碱基对。 (2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点—G↓AATTC—)和Bam HⅠ(识别序列和切割位点—G↓GATCC—)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大