传代细胞培养和病毒感染力(TCID50)的滴定剖析.ppt

在1.5ml离心管中将伪狂犬病毒(PRV)作连续10倍的稀释，从10-1-10-8。 将稀释好的病毒接种到96孔微量培养板中，每一稀释度接种一纵排共8孔，每孔接种100μl。 在每孔加入细胞悬液100μl，使细胞量达到2~3×105/ml 设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排(100μl生长液+100μl细胞悬液） 逐日观察并记录结果，一般需要观察5-7天。 结果的计算，Reed-Muench两氏法或 Karber法 lgTCID50=L-d(s-0.5) L：最高浓度的稀释度的对数 d：稀释度对数之间的差 s：阳性孔比率总和 lgTCID50=-1-1×(3.375-0.5)=-3.875 TCID50=10-3.875/0.1ml * 实验二 传代细胞培养和病毒感染力（TCID50）的滴定 了解不同传代细胞的形态、传代方法。 了解病毒感染力测定的几种方法。 掌握半数细胞培养物感染量TCID50的操作步骤、计算方法及含义。 一、实验目的 二、材 料 96孔细胞培养板、加样器(200ul)、枪头、Eppendorf管(1.5ml) BHK-21细胞 培养液：含5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM 伪狂犬病病毒液（PRV） 三、传代细胞系培养方法 取长满单层的细胞一瓶，倾去培养液。 加入1-2ml 胰酶消化液，于37℃培养箱放置几分钟，