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CHAPTER 5 細胞分裂與DNA複製 細胞分裂與DNA複製 細胞分裂和繁殖不一定相同 在許多的植物與真菌中，一大群聚集的細胞也許會終止活動，或者親代生物體會釋放單細胞的孢子，成長為個別新的多細胞生物體。新的個體與親代遺傳具有相同的特性，稱為無性 asexual 或營養繁殖 vegetative reproduction 。相較於有性 sexual 繁殖，每個細胞從兩個分別的親代得到大致相等的遺傳訊息，因此基因有新的組合。 細菌在沒有細胞分裂時，且牽涉到相似的DNA小片段從一個細胞 供應者；the donor 往另一個細胞 接受者；the recipient 的輸送。這種DNA的側向輸送 sideways transfer ，發生在同一世代的細胞間，被認為是水平的基因傳播 horizontal gene transmission 。相反的，垂直基因傳播 vertical gene transmission 為基因從之前的世代傳到下個新的世代。因此垂直傳播包含了細胞分裂的所有形式與繁殖，可創造一個新的複製基因體，不論是有性或無性。 DNA複製發生在複製叉上，是一種兩階段的過程 複製 replicaion 為一種始祖細胞的DNA加倍的過程，發生於細胞分裂之前。細胞分裂時，每一個子代會得到一份完整的複製DNA，與原本親代的遺傳物質相同。 複製叉是DNA複製時，酵素解開DNA結構時，結合在已解開的單股DNA的區域。兩條新的DNA股合成都在複製叉 replication fork 上，此交叉點會沿著親代DNA移動。 複製叉包含DNA分開的區域，再加上負責合成的蛋白質集合，有時稱為複製體 replisome 。複製的結果為兩個雙股DNA，而且序列都與原來的相同。子代細胞其中一個有原本細胞左邊的一股，另一個具有原本細胞右邊的一股。複製是採半保留的 semi-conservative 方式，因為每個子代都保留一半原來的DNA物質。 超螺旋引起複製的問題 超螺旋的細菌染色體為環狀的，而且兩個複製叉以相對的方向繞著環狀進行作用 。這過程就是雙向複製 bi-directional replication 。環狀的DNA分裂時，中間會出現像希臘字母θ theta 的構造，所以這種模式也稱作θ複製 theta-replication 。 在大腸桿菌中有兩種第二型拓樸異構酶，即DNA促旋酶 DNA gyrase 與拓樸異構酶IV topoisomerase IV ，影響了DNA的複製。 DNA促旋酶會結合在複製叉的前端DNA上，引起可以取消正螺旋的負螺旋。淨結果 net result 為DNA促旋酶移除複製叉前面的超螺旋結構。拓樸異構酶IV在過程中或其他方面有協助的作用，但主要的功能，是解開複製完成後的子代DNA物質。 喹啉酮 quinolone 抗生素利用在第二型拓樸異構酶上的作用，抑制了細菌DNA的複製，特別是DNA促旋酶。受到抑制的DNA促旋酶仍然結合在DNA的位置上，並且阻止複製叉的移動，而整個反應的結果為導致細胞死亡。 雙股分離在DNA合成之前 雙股螺旋構造會自動地被DNA解旋酶 helicase 解開。大腸桿菌最主要的解旋酶，是形成六合體 hexamer 的蛋白質DnaB。解旋酶不會損毀DNA，只是干擾維持鹼基聚合在一起的氫鍵。此過程需要能量的供應，而能量由解旋酶降解ATP所提供。 親代DNA分離的兩股為互補，所以可互相配對。為了製造出新的股，原來的兩股必須分離，當作模板使用。這工作由單股結合蛋白質 single strand binding protein; SSB protein 來完成。此蛋白質可以結合在未配對的單股上，避免兩段原來股重新黏合。 DNA聚合酶的特性 聚合酶 polymerase 為一種可以將核苷酸聚集在一起的酵素。細菌細胞包含幾種DNA聚合酶，對DNA複製與修復有不同功能。有關DNA複製的問題根源於DNA聚合酶 DNA polymerase 的特性，此酵素負責製造新的DNA。 DNA聚合酶利用其他酵素製造的短片段的RNA引子，去起始新股的合成。與DNA聚合酶不同的RNA聚合酶 RNA polymerase 可以起始新股的合成。 一個特殊的RNA聚合酶，如引發酶 primase ；蛋白質DnaG，在細菌DNA合成製造期間，主要負責起始DNA股合成的RNA引子。 核苷酸的聚合 不論是DNA或RNA，所有核苷酸的合成方向皆為5’- 至3’-。外加進來的核苷酸會附在3’-的羥基 hydroxyl group 上。 DNA合成的前驅物質為去氧核糖核苷三磷酸或稱為去氧核糖核苷酸 deoxyribonucleoside 5’-triphosp