实验一常用仪器使用及玻璃器皿准备.doc

实验一 常用仪器使用及玻璃器皿准备（2学时） 实验目的：使学生掌握微生物实验室常用玻璃器皿的洗刷、包装、灭菌；主要仪器设备的使用、保养及注意事项。 一、实验物品：各种玻璃器皿。 1.试管：共60支，每屋30支； 2.平皿：共60支，每屋30支； 3.烧杯：达大中小个4个，每屋2个； 4.量筒：50ml、200ml的个4个，每屋2个； 5.三角瓶：250ml、500ml各4个，每屋2个； 6.吸管：1ml、5ml、10ml共个10支，每屋5支； 7.报纸：共30张，每屋15张； 8.脱脂棉：共2包，每屋1包； 9.曲别针：20个，每屋10个； 10.废旧针头：20个，每屋10个； 11.邦绳：1卷，分2份； 12.洗衣粉2袋，每屋1袋； 13.试管刷：大中小个数把，每屋个5把； 14.每屋一个大塑料盆； 二、实验内容： （一）玻璃器皿的类别、规格的识别和使用说明 1.培养皿： 常用的是直径9cm，高15mm。 2.试管：常用中管，13-15mmX100-150mm。 3.Eppendorf管：1.5ml、0.5ml规格。 4.玻璃吸管：常用有刻度吸管。0.1ml、1ml、2ml、5ml、10ml。 5.移液抢：又称微量洗液器。1-10微升、2-20微升、20-100微升、1000微升等。 6.三角瓶与烧杯：25ml、50ml、100ml、150ml、200ml、250ml、500m、1000ml、2000ml等。 7.注射器：1、2、5、10、20、25ml、50ml等。 8.试剂瓶：关口与小口。 9.玻璃缸：放消毒液消毒载玻片、吸管等。 10.载玻片和盖玻片： 11.双层瓶： 12.滴瓶：装染料和试剂。 （三）玻璃器皿的洗涤方法 1.注意事项： （1）用过的玻璃器皿必须及时洗刷处理。 （2）油污染的和非油污染的玻璃器皿要分开处理。 （3）对微生物污染的玻璃器皿，要现用5%石碳酸、3%的来苏尔消毒。 （4）防制玻璃器皿的损坏。 2.洗涤剂的种类： （1）水： （2）去污粉：含碳酸钙、硫酸镁、硼砂等，具有摩擦去污作用。 （3）肥皂：油滞污染的器皿。 （4）洗衣粉：对带油的玻璃器皿洗刷效果好。 （5）洗涤液：常指含重铬酸钾的硫酸溶液。用于玻璃器皿、搪瓷制品。 （6）弄硫酸与强碱液（40%）：器皿上粘油焦油、凡士林、树脂类物质，可以用上述溶液洗涤。 （7）有机溶剂：汽油、酒精、二甲苯等。用于洗涤不溶于水的有机物污染。 3.常用玻璃器皿的洗涤方法： （1）新购置的玻璃器皿：用2%的盐酸溶液浸泡数小时后，再用水充分洗涤后用。 （2）用过的玻璃器皿：培养过细菌的试管、平皿讲其培养物倒掉后另行处理。对于试管和平皿直接进行煮沸处理。如果培养的是病原微生物，那么必须进行高压灭菌之后才能洗涤。若果固体培养基没有及时洗涤，干燥以后，将其蒸煮，趁热倒掉培养物后再行洗涤。 洗涤是一般用试管刷。 （3）吸管的洗涤： （4）载玻片与盖玻片：一般直接放入95%的酒精中浸泡，用时用镊子夹起，再酒精等上将酒精点着，熄灭后可以用。 盖玻片用水煮沸后，拿出晾干就可以用。 4.玻璃器皿灭菌前的包装： （1）平皿的包装： （2）吸管的包装： 5.灭菌： （四）棉塞的制作技术 （一）棉塞的作用 过滤杂菌、空气流通的作用。所以，松紧适宜。 （二）棉塞的制作技术 做示范。 （五）接种工具 1.接种环：过去用铂金、现在用镍铬丝。 2.涂菌棒：将玻璃棒（5-6mm直径）在酒精喷灯上弯成倒三角形。 （六）常用仪器及其使用要求 1.恒温培养箱： 2.超净工作台： 3.高压灭菌锅； 4.干热灭菌箱： 5.摇床： 6.冰箱： 7.离心机： 实验二 细菌抹片的制备、染色及形态观察（2学时） 实验目的：学习并掌握革兰氏染色技术程序。 二、原理： 三、材料： （1）菌种（大肠杆菌、链球菌平板培养物）； （2）革兰氏染色剂（共4套，放于小汤磁盘，包括1瓶蒸馏水放于滴瓶）； （3）其他材料： 显微镜（用生物教研室的）； 香柏油与二甲苯（放于双层瓶，共4瓶）； 擦镜纸（切成小方块，放于平皿内，准备4个）； 接种环（共10把）； 载玻片（共2盒，将其分别放于两个250ml烧杯内再放入95%酒精浸泡，每屋一个）； 特种铅（共10支，每屋5个）； 吸水纸（每屋A4纸张大小5张）； 酒精灯（共10盏，每屋5个）； 洗瓶（4个，每屋2个）； 染色缸（4个，每屋2个）。 纱布：适量。 四、操作 1.制片：载玻片上滴蒸馏水1环——钓取少许菌落——混均——干燥、固定——放于染色缸 2.染色： 初染：在载玻片上滴加适量结晶紫染色液，染1min，水洗。 媒染：滴加鲁格氏碘液1min，水洗。 复染：滴加复红染色液3-5min，水洗。 晾干：在空气中晾干或放于温箱中数分钟，或用吸水纸吸干。 3.镜检：先用低倍镜，再