EB病毒相关胃癌组织中NF―κB及bcl―2蛋白表达的研究.docVIP

EB病毒相关胃癌组织中NF―κB及bcl―2蛋白表达的研究 　　【摘要】 目的 探讨NF-κB及bcl-2蛋白在EB病毒相关性胃癌（EBVaGC）与非EB病毒相关性胃癌（EBVnGC）中的表达及意义。方法 应用原位杂交技术（ISH）检测84例胃癌组织中EB病毒小RNA（EBER）表达情况；应用免疫组织化学方法（S-P法）检测84例胃癌组织中NF-κB及bcl-2蛋白表达情况。结果 ⑴9例（10.7%）胃癌组织EBER原位杂交阳性，属于EBVaGC；75例（89.3%）胃癌组织EBER原位杂交阴性，属于EBVnGC。⑵9例EBVaGC中7例（77.8%）NF-κB表达阳性，75例EBVnGC中28例（37.3%）NF-κB表达阳性，NF-κB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异（P0.05）。结论 EBVaGC中NF-κB蛋白的高表达，提示EB病毒可能通过影响细胞转录调控而参与了EBVaGC发生、发展的过程。 　　【关键词】 EB病毒相关性胃癌；非EB病毒相关性胃癌；NF-κB；bcl-2 　　【中图分类号】R735.2 【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2013）12-0015-01 　　基金项目：广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题（合同号：Z2011113） 　　EB病毒（EBV）属于DNA疱疹病毒，该病毒编码大于85个基因组，大部分人群都感染过EB病毒，而且EB病毒与很多淋巴源性及上皮源性肿瘤密切相关。有研究表明，约有10%的胃癌与EB病毒感染有关[1]，故这类胃癌又被称为EB病毒相关性胃癌（EBVaGC）。NF-κB作为重要的转录调控因子，起着核心枢纽作用，它可以调控很多基因表达，而这些基因又与细胞增殖、分化、凋亡、免疫反应、转化有着密切的联系；bcl-2能抑制细胞凋亡，延长细胞生存期，进而引发肿瘤。胃癌的发生、发展是一个多步骤、多因素影响的过程，涉及的机制非常复杂，本文通过原位杂交方法检测胃癌中EBER表达情况及免疫组化方法检测NF-κB和bcl-2的表达情况，探讨它们与胃癌临床病理特征的关系及意义。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 选择广西中医药大学第一附属医院2008年1月～2013年6月手术切除并经病理检测证实为胃癌的蜡块标本84例，所有病例术前均未进行放疗、化疗，病理类型均为腺癌。其中男性48例，女性36例；年龄32～87岁，平均年龄56岁。 　　1.2 EBER原位杂交 EBER原位杂交试剂购于PanPath公司。组织蜡块切成4um粘附于防脱片上，常规脱蜡及水化，蛋白酶K消化。滴加适量杂交液，55℃下孵育1.5小时，转移至37℃下孵育12小时，PBS浸泡洗涤，滴加适量一抗，于37℃下孵育30分钟，拭去组织周围的液体，滴加适量二抗，于室温下孵育20分钟。拭去组织周围的液体，滴加适量HRP聚合物，室温下孵育30分钟，PBS浸泡洗涤后滴加适量DAB显色液，在室温下孵育约3-10分钟，同时在镜下观察显色程度。 　　1.3 免疫组织化学法 NF-κB及bcl-2单克隆抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。5μm厚切片。常规脱蜡水化后，柠檬酸高压修复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，其余步骤按试剂盒说明进行操作。用PBS替代一抗作为阴性对照，用已知阳性片作为阳性对照。 　　1.4 结果判读 EBER原位杂交结果判定：EBER阳性表达于细胞核，呈棕黄色。免疫组化采用Volm使用的半定量法[2]：NF-κB阳性表达部位为胞质和（或）胞核，bcl-2阳性表达部位为胞质和（或）胞膜。1.5 统计学分析 应用SPSS15.0 软件进行统计学分析，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 EBER在胃癌组织中的表达 84例胃癌组织中9例（10.7%）胃癌组织EBER原位杂交阳性，属于EBVaGC（见图1）；75例（89.3%）胃癌组织EBER原位杂交阴性，属于EBVnGC。 　　2.2 NF-κB在胃癌组织中的表达 9例EBVaGC中7例（77.8%）NF-κB表达阳性（见图2），75例EBVnGC中28例（37.3%）NF-κB表达阳性，NF-κB的表达在EBVaGC及EBVnG间存在差异（P0.05）（详见表1）。 　　2.3 bcl-2在胃癌组织中的表达 9例EBVaGC中6例（66.7%）bcl-2表达阳性（见图3），75例EBVnGC中38例（50.7%）bcl-2表达阳性，bcl-2的表达在EBVaGC及EBVnG间无明显差异（P0.05）（详见表1）。 　　图1 胃癌中EBER的表达 ×200 　　图2 胃癌中NF-κB的表达 ×200 　　图3 胃癌中bcl-2的表达 ×200 　　表1 胃癌组织中NF-κB及bcl-2蛋