免疫标记在肿瘤应用.doc

肿瘤病理诊断新技术 免疫组化技术 免疫组化技术现已广泛应用于病理诊断，不仅在解决疑难病例诊断方面起着重要作用，随着人们医疗风险意识的增强，许多普通的病例也常常需要免疫组化进一步证实，因此成为病理科医生常规工作中不可缺少的重要工作、常规手段。 在小活检病理检查中免疫组化技术能明确地显示癌细胞的存在（如胃粘膜活检中的印戒细胞癌），可使微小癌、微小转移灶（淋巴结及骨髓）、甚至不易察觉的病变得以确诊。 通过乳腺癌激素受体（ER、PR）的检测，免疫组化技术在指导临床治疗方面已起到了重要的作用。通过检测针对肿瘤基因产物（C-erbB2、P53、ALK、CD117等）的抗体还将进一步为分子靶向治疗提供重要的参考依据。细胞增殖核抗原（Ki-67）等免疫组化染色可为肿瘤的预后提供依据。 免疫组化技术的局限性：至今无绝对特异的抗体！相当多的肿瘤缺乏特异的抗原表达；同一种抗原常常可在多种肿瘤中表达，不少肿瘤又由于分化太差或细胞分子结构改变而不表达相关的抗原。不同抗体滴度有不同的阳性结果；内源性生物素造成假阳性，如肝细胞癌等；缺乏免疫组化的标准化（同一实验室及不同实验室间结果的一致性）；定量结果的判断等还存在不少的问题尚待解决，如ER受体，有的实验室只要有阳性肿瘤细胞就视为阳性，而有的实验室则要至少20％细胞阳性才视为阳性，阳性标准往往是随意确定的，未经临床病理研究证实。 如何正确应用免疫组化呢? 要得到正确、有价值的免疫组化结果，免疫组化实验室规范、合适的技术操作（包括组织固定、抗原修复、检测系统、各类试剂的质量保证、染色技术等）是最重要的基础保证，但病理科医生在组织块的选择、抗体的选择、结果的判断等方面也起着不容忽视的作用。 二 分子病理学 这是继电镜、免疫组化之后的第三个浪潮。其优点是反应特异、敏感，检测靶信号本质上不同，DNA检测温度固定影响小。采用的方法包括PCR、滤膜杂交（斑点、印迹转移），原位杂交、荧光原位杂交（FISH）、显微切割技术、比较基因组杂交、生物芯片（基因芯片、蛋白质芯片、组织芯片）等。 分子病理学检测内容包括肿瘤基因(癌基因、抑癌基因/原癌基因)、点突变、染色体重排（易位、倒转—过表达/新的杂合基因）、基因扩增和缺失等。分子病理学检测为肿瘤定性、分类、预后判断可起到重要的帮助。 显微切割技术是90年代出现的一项新技术，这项技术对肿瘤、细胞生物学及分子生物学研究有巨大的推动作用。该技术能够在显微镜下，从组织切片上切下小片组织或单个细胞，用这些切下的材料进行PCR扩增，能够得到同类细胞，甚至单个细胞的基因，这样研究结果更为准确。 组织芯片又称组织微阵列（tissue microarray）, 是1998年在cDNA微阵列的基础上发明的一种特殊的生物芯片，是继基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家族的又一新成员。 组织芯片的原理是根据不同需要，利用特殊的仪器，将多个（病例）小组织片高密度的、整齐的排列固定在某一固相载体上（载玻片、硅片、聚丙烯或尼龙膜等），而制成微缩的组织切片。其最大潜在作用是将基因、蛋白水平的研究与组织形态学相结合，使应用同一实验指标，同时快速研究大量不同组织样本（高通量、多样本）的设想成为现实，减少了实验误差，几十倍、上百倍的提高组织病理学研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果有更可靠的可比性；对于原始病理资料的保存和大量样本的回顾性研究具重要的意义。 组织芯片的应用范围：研究目的基因在不同病变（肿瘤）间的表达差异；寻找疾病新基因，疾病（肿瘤）中新基因、突变体与基因多态性的检测，药物的筛选；疾病的病理诊断；质量控制等。 原位杂交－是在一定的生物结构基础之上的核酸杂交，这种结构基础可以是一条染色体、一个细菌、更大的结构基础是细胞和组织。故此杂交的共同点是有明确的结构基础，可反映基因杂交的准确部位。 免疫组化技术在肿瘤病理诊断中的应用 一、免疫组织化学的工作原理 1、 已知的特异性抗体或抗原能特异性结合 2、 通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂，如酶，金 属离子、同位素等，显示一定的信号（如：颜色） 3、 借助显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构 二、应用范围： (1)提高病理诊断准确性 (2)对疾病的预后和治疗的意义 (3)对肿瘤增生程度的评价 (4)微小病灶的发现 微小癌，微小病灶（如羊水栓塞） (5)指导肿瘤的治疗 (6)恶性淋巴瘤及白血病的诊断及分型 (7)病原微生物的检测 三、常用的肿瘤标记 1上皮性肿瘤标记物 (1)共同的标记