成年大鼠背根节神经元分散培养.docVIP

成年大鼠背根节神经元分散培养 1．材料和方法 取3-6 月龄的SD雄性大鼠。无菌条件下除去背部皮毛, 然后剪取一段脊髓,背侧朝上置于灭菌毛玻璃片上,在解剖显微镜下沿椎管两侧水平剪除腹侧一半椎骨,暴露脊髓和神经节,用解剖镊取出神经节。置于含 1 % 胶元酶 Collagenase 和1 % 消化酶 Dispase 的2ml混合消化液中消化 37℃， 1 h 分散后，用种植 Plating 培养液稀释成0.2×105个细胞/ml密度的的细胞悬液；接种于涂有小牛皮胶或以小鼠脑皮层胶质细胞为背景的35mm塑料培养皿中，每皿2ml细胞悬液置。置标本于36℃、10%CO2培养箱中培养。24h后倾去培养皿内种植培养液,改用饲养 Feeding 培养液培养。接种第3天, 在培养皿中分别加入细胞分裂抑制剂5-氟-2-脱氧尿苷15μg/ml和尿苷35μg/ml, 作用48小时后更换新鲜饲养培养液,以后每周换液两次, 每次更换一半新鲜饲养培养液。 2． 成年大鼠背根节神经元的生长分化和形态特征 成年大鼠背根节神经元在含 NGF 的培养液中种植后4h, 细胞即开始贴附在胶元薄膜层上生长, 背根节神经元的胞体一般为圆形, 有时亦可见椭圆或梭形,体积较大, 直径约8-14μm左右,胞体周围呈现一圈光晕,神经元的细胞核大多偏于胞体一侧,核仁明显。接种后24h, 部分贴壁存活神经元开始长出突起。培养2-3天后,神