食品微生物之檢驗方法－金黃色葡萄球菌之檢驗.docVIP

食品微生物之檢驗方法－金黃色葡萄球菌之檢驗 1. 適用範圍：本方法適用於食品中金黃色葡萄球菌及其腸毒素（enterotoxins）之檢驗。 2. 檢驗方法 2.1. 工作環境：工作平台須寬敞、潔淨、光線良好，操作平台光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。 2.2. 器具及材料 2.2.1. 乾熱滅菌器。 2.2.2. 高壓滅菌釜。 2.2.3. 冰箱：能維持5 ± 3℃者。 2.2.4. 培養箱：能維持內部溫度溫差± 1.0℃以內者。 2.2.5. 水浴：能維持水溫溫差± 0.2℃以內者。 2.2.6. 攪拌均質器（Blender）或鐵胃（Stomacher）：能適用於無菌操作者。 2.2.7. 天平：可稱量到2000 g，靈敏度為0.1 g；可稱量到120 g，靈敏度為5 mg。 2.2.8. 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。 2.2.9. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 2.2.10. 離心機：轉速可達3000 rpm以上。 2.2.11. pH測定儀。 2.2.12. 加熱器。 2.2.13. 吸管輔助器（Pipette aid）。 2.2.14. 微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。 2.2.15. 吸管（Pipette）：已滅菌。1 mL吸管應有0.01 mL之刻度、5及10 mL吸管應有0.1 mL刻度。 2.2.16. 吸管尖（Tip）：可滅菌。10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。 2.2.17. 培養皿：已滅菌，內徑約90 mm，深度約15 mm，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 2.2.18. 稀釋用容器：無菌袋或有1000 mL、500 mL、99 m及90 mL標記附蓋（栓）之可滅菌廣口瓶。 2.2.19. 試管：10 × 100 mm，13 × 100 mm試管或其他適用者。 2.2.20. 無菌濾膜：孔徑0.45 μm或以下之親水性醋酸纖維濾膜。 2.2.21. 無菌棉花棒或塗抹棒。 2.2.22. 載玻片及蓋玻片：適用於染色及鏡檢者。 2.2.23. 接種針及接種環（直徑約3 mm）：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。 2.2.24. 藥勺、剪刀、小刀、壓舌板及鑷子：可滅菌或可拋棄式者。 2.2.25. 塗抹曲棒：可滅菌者，直徑3～4 mm，塗抹區域45～55 mm。 2.2.26. 試藥：氯化鈉、磷酸二氫鈉（NaH2PO4．H2O）、無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、30%過氧化氫溶液、乙二胺四醋酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）、結晶紫 （crystal violet）、碘化鉀、草酸銨、碘、沙黃O（safranin O）、氫氧化鈉、磷酸二氫鉀（KH2PO4．H2O）、亞碲酸鉀（potassium tellurite）、葡萄糖、甘露糖醇（mannitol）、丙酮酸鈉（sodium pyruvate）、液態石蠟油或礦物油及乙醇等均採用化學試藥級。蛋白腖、溶菌素（lysostaphin）及凝固酶血漿（兔來源，經EDTA處理）採用微生物級。 2.2.27. 試劑 2.2.27.1. 3%過氧化氫溶液：取30%過氧化氫溶液1 mL加蒸餾水使成10 mL，使用時新鮮配製。 2.2.27.2. 1%亞碲酸鉀溶液：取亞碲酸鉀1 g溶於蒸餾水100 mL，稍加熱，使其完全溶解 （當有白色不溶物存在，則表示此亞碲酸鉀粉末已不可使用），溶液經0.22 μm孔徑濾膜過濾，貯存於冰箱中備用，當有白色沉澱產生即不可使用，使用期限以不超過1個月為宜。 2.2.27.3. 含1%氯化鈉之0.02 M磷酸鹽緩衝溶液 溶液A：取無水磷酸氫二鈉28.4 g及氯化鈉100 g溶於蒸餾水中，使成為1000 mL，混勻。續取混合液50 mL，加蒸餾水使成500 mL，混勻，備用。 溶液B：取磷酸二氫鈉27.6 g及氯化鈉100 g溶於蒸餾水中，使成為1000 mL，混勻。續取混合液10 mL加蒸餾水使成100 mL，混勻，備用。 將溶液B徐徐加至溶液A中，攪拌均勻，直至pH值為7.3～7.4，即為含1%氯化鈉之0.02 M磷酸鹽緩衝溶液。 2.2.27.4. 溶菌素溶液：取溶菌素2 mg溶於2.2.28.3節之含1%氯化鈉之0.02 M磷酸鹽緩衝溶液40 mL，取適量分裝後，冷凍保存，使用期限以不超過3星期為宜。 2.2.27.5. 液態石蠟油或礦物油：取液態石蠟油或礦物油20～50 mL，裝入附蓋容器中約1/2滿，以121℃滅菌30分鐘。 2.2.27.6. 革蘭氏染色液（Gram stain solu