蛋白质组学结构测定重点.ppt

* 针对不同的样品，电镜又可以细分为3种方法。其中比较重要的是单颗粒技术。 * * 这篇是5月7日发表在science上的最新成果。电镜的分辨率已经达到了2.2 A。 * 目前已知的蛋白质结构有90%是用x射线晶体学获得的，但是x射线晶体学也面临一些问题。 * 通常对光源的宽度要求是不大于晶体宽度。正是由于这几个优点，使得可以使用很小的晶体，同时避免了辐射损伤。 * X射线自由电子激光和x射线晶体学原理一样，实验中首先获得纳米尺度大小的蛋白晶体配制成一定浓度的悬浮液，样品流从进样针中流出，在真空反应腔中飞行，然后与X射线脉冲相互作用产生衍射，最后由两组CCD检测器收集衍射点。 * * 回顾一下前面提到的问题，有：辐射损伤，获得好的晶体，进行检测样品的准备。 通过前面的实验，我们已经大体上能够解决这些困难了。利用X射线自由电子激光的飞秒脉冲代替同步辐射源解决辐射损伤，由于自由电子激光的超高光强因此只需要纳米尺度的蛋白晶体即可，同时晶体结构的测量可以在完全的水环境下进行，而不需要冷冻干燥。 * 上一篇文章发布的时间是在2011年2月，获得的分辨率为8.7 ?。在之后的几年内，X射线自由电子激光又有了很大的发展：（Table 1） 在2012年1月，通过在Sf9昆虫细胞内异源表达布氏罗德西亚锥形虫的组织蛋白酶B同时形成晶体，然后再裂解细胞分离得到晶体，然后将样品流通过X射线自由电子激光进