5—aza—dc对延边奶山羊耳成纤维细胞生物学特性的影响.docVIP

5—aza—dc对延边奶山羊耳成纤维细胞生物学特性的影响 　　摘要：通过DNA甲基转移酶抑制剂5-aza-dc对延边奶山羊耳成纤维细胞进行不同处理后，利用MTT比色法选定5-aza-dc的最适作用浓度和时间，用Hochest33342/PI双染和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况，通过核型分析检测5-aza-dc对细胞染色体的影响。结果表明，低浓度的5-aza-dc（≤0.010 μmol/L）作用72 h对细胞影响不大；随其浓度的增加，细胞形态、活率、凋亡及染色体都受到显著影响。5-aza-dc对细胞的最佳处理时间为72 h，此时低浓度的5-aza-dc并未引起细胞凋亡和核型改变。 　　关键词：5-aza-dc；延边奶山羊；细胞活率；细胞形态；细胞凋亡 　　中图分类号：S827 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）12-2862-04 　　Effect of 5-aza-dc on the Biological Characteristics of Yanbian Dairy Goat Ear Fibroblast Cell 　　CAI Li-juan，YIN Duo，ZHUANG Li-li，FNAG Nan-zhu，LI Zhong-shu 　　（Animal Genetic and Breeding Reproduction Laboratory， Agricultural College， Yanbian University， Yanji 133002，Jilin，China） 　　Abstract： To research the effects of DNA methylation inhibitor 5-aza-dc on biological characteristics of Yanbian dairy goat ear fibroblast cell， MTT method was used to determine the optimal action concentration and time of 5-aza-dc on Yanbian dairy goat ear fibroblast cells. PI and Hochest33342 double staining， agarose gel electrophoresis were used to detect apoptosis of the cells； and karyotype analysis to measure the effect of 5-aza-dc on the chromosomes. The results showed low concentration（≤0.010 μmol/L） of 5-aza-dC treatment for 72 h had little effect on the cells. With the increasing of concentration， cell morphology， viability， apoptosis and chromosomes were all significantly affected. The best processing time of 5-aza-dc was 72 h， low concentration of 5-aza-dc did not lead to apoptosis and karyotype change. 　　Key words： 5-aza-dc； Yanbian dairy goat； cell morphology； cell viability； cell apoptosis 　　体细胞核移植是哺乳动物胚胎工程的主要组成部分，也一直是研究的热点。然而核移植研究中仍然存在着许多问题，如核移植效率低、胚胎发育异常、流产、畸形等。大量研究表明，体细胞核移植所用的供体细胞（成纤维细胞、颗粒细胞等）都是高度分化的细胞，具有较高的甲基化水平，在与受体细胞融合时需要经过去甲基化才能维持胚胎正常发育，如果重构胚基因组DNA的甲基化模式存在异常，可引起特定基因转录模式发生改变，从而导致重构胚发育异常。因此，有必要寻找一种降低DNA甲基化水平，进而改善核移植效率的方法。5-氮-2′-脱氧胞嘧啶核苷（5-aza-dc）是一种DNA甲基转移酶抑制剂，为正常胞嘧啶核苷的类似物。在细胞内这种核苷类似物可以转化为脱氧核苷三磷酸，并在DNA复制的过程中替代正常的胞嘧啶核苷酸参与到延伸的DNA链中，一旦进入DNA双链后，它们所含有的修饰碱基——5-氮胞嘧啶可以与DNA甲基转移酶共价结合，使酶的活性降低