植酸酶活性的测--钼蓝法.docVIP

植酸酶活性的测定——钼蓝法 1 原理 针对预混料复杂的物料体系，用不同的缓冲液对其进行抽提，最大限度的减少饲料中无机磷，微量元素，多维及其他成分对植酸酶测定的影响，用钼蓝法对抽提液中植酸酶活性进行定量。 植酸酶在一定温度和pH条件下，水解底物植酸钠生成正磷酸和肌醇衍生物，在酸性环境中与钼酸铵显色剂反应生成蓝色的（Mo2O3?MoO3）复合物，在波长700nm下比色测定。 酶活力单位：在37℃、H5.0条件下，每分钟从植酸钠溶液中释放出1微摩尔的无机磷为1个酶活力单位.4 终止液：5%三氯乙酸（5%TCA）。 2.5 1.5％钼酸铵（试剂A）：7.5g钼酸铵溶于400ml水中，慢慢加入22ml浓硫酸，水定容到500ml，冰箱储存，有效期1个月。 2.6 2.7％硫酸亚铁（试剂B）：冰箱储存，有效期1个月。 2.7 显色剂：移取4份试剂A（2.5），1份试剂B（2.6）混合后使用，现用现配。 2.8 磷酸二氢钾：称量前于烘箱中烘至恒重，用乙酸缓冲液（2.2）配制50mmol/L标准液，再用50mmol/L配制成4.0mmol/L磷酸二氢钾，溶剂为乙酸缓冲液（2.2），冰箱储存。 3 仪器设备 恒温水浴锅，分光光度计（有10mm比色皿），磁力搅拌器，涡流式混合器，酸度计（精确至小数点后两位），离心机（最高转速4,000rpm以上），其它实验室常用设备。 4 标准曲线绘制 将4.0mmol