20131015 SDS-PAGE测定蛋白质分子量.ppt

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 张楠楠 一 目的要求 学习ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定蛋白质 分子量的原理 掌握ＳＤＳ－ＰＡＧＥ垂直板测定 蛋白质分子量的操作方法 测定本实验条件下样品的分子量 二 原理 　　SDS是PAGE的一种特殊式。SDS（十二烷基硫酸钠 ）是带负电荷的阴离子去污剂，用SDS测定蛋白质分子量时，蛋白质需经样品溶解液处理。在样品溶解液中含有巯基乙醇及SDS，各种蛋白质样品在巯基乙醇作用下，还原成单链，再进一步与SDS结合形成带有大量负电荷的SDS-蛋白质复合物，因此各种蛋白质分子在SDS中，只能按其分子量大小而分离。 SDS带有大量的负电荷，与蛋白结合时，使之都带上相同密度的负电荷，掩盖了蛋白间电荷的差异 SDS与蛋白结合后，引起蛋白构象的改变，为近似雪茄烟的长椭圆形，短轴相同，长轴与分子量成正比 迁移率只有分子量有关 在不连续电泳中: 电荷效应 浓缩效应 分子筛效应 在连续电泳中: 电荷效应 分子筛效应 在SDS中: 分子筛效应 SDS有连续体系和不连续体系两种 两种体系有各自的样品溶解液及缓冲液，但加样方式，电泳过程及固定、染色与脱色方法完全相同。 三 试剂与器材 1.试剂 -标准蛋白质 低分子量标准蛋白质试剂盒 兔磷酸化酶B 97400 牛血清白蛋白 66200 兔肌动蛋白 43000