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作业指导书 编号ZQCDC／ZY50 第1页 共5页 食品微生物学检验沙门氏菌检验 第2版 第1次修订 实施日期：2011年05月01日 1、目的： 依据GB/T4789.4—2010食品卫生微生物学检验中沙门氏菌检验规程，规范操作者的检验方法，保证测定结果的准确性。 2、适用范围： 本标准规定了沙门氏菌检验方法，本标准适用于食品中沙门氏菌的测定。 3、责任：使操作者熟悉本规程，并在具体检验中严格遵照操作，确保检测结果准确。 4、设备和材料（除微生物实验室常规灭菌培养设备外，其它设备和材料如下：） 4.1 恒温培养箱：36℃±1℃，42℃±1℃。 4.2 冰箱：2℃～5℃。 4.3 无菌毛细管。 4.4 电子天平：感量0.1g。 4.5 均质器。 4.6 振荡器。 4.7 无菌吸管：1ml 具0.01mL刻度 、10mL、（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 4.8 无菌锥形瓶：容量250mL、500mL。 4.9 无菌培养皿：直径90mm。 4.10 PH计或PH比色管或精密PH试纸。 4.11 全自动微生物鉴定系统。 4.12 无菌试管：3mm╳50mm、10mm╳75mm 5、培养基和试剂 5.1 缓冲蛋白胨水（BPV） 5.2 四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液 5.3 亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液 5.4 亚硫酸铋（BS）琼脂 5.5 HE（Hektoen Enteric）琼脂 5.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂 5.7 科玛嘉沙门氏菌属显色培养基 5.8 三糖铁（TSI）琼脂 5.9 蛋白胨水、靛基质试剂 5.10 尿素琼脂（PH7.2） 5.11 氰化钾（KCN）培养基 5.12 赖氨酸脱羧酶试验培养 5.13 培养糖发酵管 5.14 邻硝基酚B-D半乳糖苷（ONPG）培养基 5.15 半固体琼脂 5.16 丙二酸钠培养基 5.17 沙门氏菌O和H诊断血清 5.18 API20E生化鉴定试剂盒或VITEK GNI+生化鉴定卡 作业指导书 编号ZQCDC／ZY50 第2页 共5页 食品微生物学检验沙门氏菌检验 第2版 第1次修订 实施日期：2011年05月01日 6、检验程序见图1 7、操作步骤 7.1 前增菌 7.1.1 称取25g样品置盛有225mLBPW的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min,或放入盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min,若样品为液体态，不需要均质，振荡混匀。如需要，测定PH值，用1mol/mL无菌氢氧化钠盐酸调PH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。 如为冷冻产品，应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。 7.2增菌 轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL,转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL,转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。 7.3分离 分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平或 科玛嘉显色培养基平板）。于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、科玛嘉显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落，各个平板上的菌落特征见表1。 表1 沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征 选择性琼脂平板 沙门氏菌 BS琼脂 菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变 HE琼脂 蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色 XLD琼脂 菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心 科玛嘉显色培养基 菌落为紫红色 7.4生化试验 7.4.1自选择性琼脂平板上分别挑取两个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，先在斜面划线，再于底层穿刺；接种针不要灭菌，直接接种赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于于36℃±1℃培养18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸羧酶试验培养基内，沙门氏菌属的反应结果见表2 表2说明，在三糖铁琼脂内斜面产酸，底层产酸，同时赖氨酸脱羧酶试验阴性的菌株可以排除。其他的反应结果均为沙门氏菌属的可能，同时也均有不是沙门氏菌属的可能。 作业指导书 编号ZQCDC／ZY50 第3页 共5页 食品微生物学检验沙门氏菌检验 第2版 第1次修订 实施日期：20