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生物技术大实验I 讲义 甘丽萍/肖国生 重庆三峡学院生命科学与工程学院 实验教学进度表（共32学时） 周 次 实验项目名称 组次 计划学时 实验内容 6 生物技术大实验基础知识 2 5 生物技术实验室基本规则； 分子生物学仪器使用及注意事项；生物技术试剂及培养基配制及使用规则。 7 质粒DNA的提取 2 7 碱裂解法提取质粒DNA； DNA电泳检测及结果分析； 凝胶成像系统的使用。 8 动物组织RNA的提取 2 7 动物组织RNA的提取及检测； 能判断提取mRNA质量。 9 感受态细胞的制备及转化筛选 2 7 细菌培养和培养菌液OD值的检测； 感受态细胞的制备方法； 质粒转化及筛选。 掌握大肠杆菌的转化方法； 熟练掌握质粒重组子的抗性筛选。 10 DNA的限制性内切酶酶切反应 6 DNA的限制性内切酶酶切 电泳分析酶切凝胶结果分析。  实验一 生物技术大实验基础知识 【实验目的 介绍分子生物学实验室基本规则； 学习分子生物学仪器使用及注意事项； 掌握常用试剂及培养基配制和使用规则。 【实验 一、分子生物学实验课的目的和要求 分子生物学实验课程的设立为系统培养学生在分子生物学领域基本技术和技能，通过学生的独立实验设计和实践，培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力,掌握分子水平的基本技术，为以后的学习和工作打下良好技术基础。 二、实验的进行程序和要求 1．预习 学生在课前应认真预习实验指导以及教材有关章节，必须对该次实验的目的要求、实验内容、基本原理和操作方法有一定的了解。 2．讲解 教师对该实验内容的安排及注意事项进行讲解，让学生有充分的时间按实验指导的要求进行独立操作与观察。 3．独立操作与观察 除个别实验分组进行外，一般由学生个人独立进行操作和观察。在实验中要按实验指导认真操作，仔细观察，作好记录。 4．示教 每次的实验都备有示教内容，其目的是帮助学生了解某些实验中的难点，扩大在实验课有限时间内获得更多感性知识的机会。 5．作业 实验报告必须强调科学性，实事求是地记录、分析、综合。在实验结束时呈交。学生应认真阅读教师批改后的实验报告，不断提高实验质量。 6．小结 实验结束后，由师生共同小结本次实验的主要收获及今后应注意的问题。 三、实验规则和注意事项 1．每次上课前，必须认真阅读实验指导，明确本次实验的目的要求、实验原理和注意事项，熟悉实验内容、方法和步骤。 2．上实验课时必须携带实验指导、实验报告纸及绘图文具等，按规定座位入座。 3．实验前，要认真检查所用仪器、药品是否完好、齐备，如有缺损应及时向教师报告，自己不得随意调换标本、仪器等。没有得到教师的允许，不能动用实验室其它非本次实验所用的仪器设备。注意试验室的告示和各种说明。注意安全，对于任何不了解的药品或者仪器设备，不可触碰，避免给自己或者试验室造成损失。 4．实验时要遵守纪律。有问题时举手提问，严禁彼此谈笑喧哗，不准在实验室吃食和会客。 5．实验时要遵守实验操作规程，严格按照教师的安排和实验指导的要求进行。 6．要爱护仪器、标本和器材设备，注意节约实验材料、药品和水电。如有损坏器材应立即报告，并主动登记、说明情况。凡是有化学药品的试剂和溶液瓶上，必须贴上标签，注明名称、成份、浓度、配制日期。配制的药品本人应该在药品上贴上标签，写上配制者姓名、配置时间、试剂名称。 7.水槽：在水槽中倒入有毒废弃液后，应用大量水冲洗。垃圾也应该分类放置，一个用于放置有毒药品，一个放置废弃培养基，一个用于放置生活垃圾。 8.实验结束后，应清理实验台面，所有液体废物、酸类、染料等，应倒在废物缸内，不能倒在水槽中。认真清理好仪器、药品及其他用品，放回原处。值日生要负责清扫地面，收拾实验用品，处理垃圾，关好水、电、门窗后再离开。 四、常用仪器仪器使用及注意事项 1.培养箱 在分子生物学试验中，有很多反应都是在特定温度下进行的，这时就需要一个控温的装置。例如：用于细菌的平板培养，我们通常设定为37℃于培养箱倒置培养；其他分子生物学实验如酶切等需要25℃，30℃，37℃等条件。 2.冰箱 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。分子生物学实验中用到的试剂有些要求是4℃保存，有些要求是20℃保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温℃下保存。具体来说，不同温℃下保存的物品如下： 3.摇床 摇床是实验室常用仪器，一般有常温型和低温型两种。对于分子生物学实验室，如果能配置低温型摇床，就可以适应不同的实验需求。例如：用于大肠杆菌，酵母菌等生物工程菌种的振荡培养及蛋白的诱导表达，培养通常为28℃和37℃，诱导表达需要20-37℃；在感受态的制备过程中，需要有18℃的温℃控制；用于蛋白凝胶的染色脱色时振荡，常温使用；用于大肠杆