基因工程原理-第一章剖析.pptVIP

基因工程原理 Principle of Gene Engineering 学习内容 概论 DNA重组（限制性内切酶） 运输工具——基因克隆载体 目的基因的制备 目的基因导入受体细胞 外源基因的表达 基因工程的应用 基本要求 掌握基因克隆的基本工具，特别是不同的载体。 克隆基因的基本方法。 怎样利用基因重组技术研究基因的结构、表达和调控。 利用基因工程生产重组蛋白，基因工程在医药和农业上的应用。 能够设计一个基因克隆的程序。 PCR技术基本原理和应用 能够根据酶切结果判读酶切图谱，以及判读DNA序列的能力。 《基因工程》，龙敏南 等著，科学出版社，普通高等教育“十一五”国家级规划教材 参考书 Gene cloning, T.A. Brown. Third edition. 基因工程原理，吴乃虎编著，科学出版社 基因工程概论，张惠展编著，华东理工大学出版社。 植物基因工程原理与技术，王关林，方宏筠主编，科学出版社。 分子克隆实验指南，J. Sambtook, EF Frish, T Maniatis, 金冬雁，黎孟枫等译，科学出版社。 第一章 绪论——基因工程概况 1.1引言 1.1.1基因工程含义 ——指在体外将核酸分子插入病毒、质粒或其它载体分子，构成遗传物质的新组合，并使其掺入到原先没有这类分子的寄主细胞内，而能持续稳定繁殖。 基因工程英文： genetic engineering, gene manipulation, recombinant DNA technique, gene cloning, molecular cloning 1.1.2 基因工程理论依据 1.1.3 基因工程研究的基本路线 1.1.4基因工程发展史 （1）理论上的三大发现： 1.1.4基因工程发展史 （1）理论上的三大发现： 1.1.4基因工程发展史 （1）理论上的三大发现： DNA分子的体外切割与连接技术1970年，Smith等在流感嗜血杆菌中分离纯化了核酸限制性内切酶HindⅢ；1972年，EcoR Ⅰ。 DNA分子的核苷酸序列分析技术 基因工程载体pBR322和pUC13等载体。 Cohen发现质粒pSC101，并作为基因工程的载体使用. （3）基因工程的诞生 Cohen体外重组实验的意义： 1977年，E. coli中合成了人生长激素基因。 1978-1979胰岛素基因在大肠杆菌中表达。 1982年，培育出了超级鼠。 1985年Horsch发明了植物基因工程的基本方法：叶圆盘法，并获得转基因植株。 1990年，患有遗传免疫疾病的4岁女孩接受了基因疗法。 1990年，Perlak 将B.T.基因导入棉花获得抗虫棉 。 1991年，美国开始人类基因组计划。 1997年，“多利”绵羊诞生。 1.2 基因工程研究内容 琼脂糖凝胶电泳 0.2-50kb DNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳 1-1000bp DNA 原理:带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA混合，互补区段会退火形成双链结构。 （3）细菌的转化（Transformation） 双脱氧链终止法（Sanger法）：英国生物化学家Frederick Sanger于1977年发明 化学降解法 Maxam-Gilbert法）：250bp 1977年，A.M.Maxam和W.Gilbert建立的DNA片段序列的测定方法 DNA序列分析仪 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR ） 1985年，美国，Mullis：体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法。成果发表在Science上。 1.4 基因克隆需要特殊的工具和技术 运输工具： 细菌质粒 病毒染色体 DNA操作技术 纯化DNA 剪切DNA分子 分析DNA片段大小连接DNA分子 将DNA转入受体细胞重组子的鉴定 1.5 基因工程的意义 大规模的生产生物分子 设计构建新物种 搜寻、分离和鉴定生物体尤其是人体内的遗传信息。 医药 重组药物 基因治疗 检测遗传疾病、病原 农业 抗病虫 提高品质 提高花卉的观赏价值 抗逆性 家畜：瘦肉比；饲料利用率；加快生长 主要基因工程产品的研制、开发、上市时间 （2）核酸的分子杂交 1968年华盛顿卡内基学院 Roy Britten等 常见的分子杂交： Southern blotting： DNA， DNA/RNA Northern blotting： RNA， DNA/RNADot/slot blotting：DNA芯片 in situ hybridization：组织原位杂交 Western blotting：蛋白质/抗原、抗体 待测分子 探针 Southern Blotting杂交: 总DNA分子 酶切 DNA片段 电泳