第二章蛋白质化学forgraduatescandidates材料.ppt

4. 离子交换层析 5. 亲和层析 SDS凝胶电泳测定Pr的相对分子质量是根据各种Pr（ ）。 在一定pH值下所带净电荷的不同 B .分子大小不同 C. 分子极性不同 D. 溶解度不同 分析下列4个肽的混合物，在Dowex-1（一种阴离子交换树脂）的离子交换柱上以从pH10→1.0连续变化的缓冲系统作洗脱，试说出每种肽洗脱的相对次序。 A. 赖-甘-丙-甘 B. 赖-甘-丙-谷 C. 谷-甘-丙-谷 D. 组-甘-丙-谷 A→ B→ D→ C 用重金属沉淀pI为8的Pr，该溶液的pH值应： A. 8　 B. ＞8　 C. ＜8　　 D. ≤8　 E. ≥8 盐析沉淀蛋白质的原理是( )。 A.中和电荷，破坏水化膜 B.与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 C.降低蛋白质溶液的介电常数 D.调节蛋白质溶液的等电点 例：用硫酸铵分离血清白蛋白和球蛋白 实验原理： 在一定浓度的中性盐作用下，蛋白质颗粒失去电荷和水膜，沉淀析出 所获得的沉淀保留Pr原来的性质 球蛋白不溶于半饱和的硫酸铵溶液(析出) 白蛋白则溶于半饱和的硫酸铵溶液 白蛋白不溶于饱和硫酸铵（析出） 凯氏定氮法 （三）蛋白质的定量方法 Folin-酚试剂法（Lowry法） 双缩脲法 紫外吸收法 染料结合法（Bradfold法） Pr平均含氮量16%（6.25） 蛋白质的呈色反应: 双缩脲:紫红色 黄蛋白反应：含苯环的氨基酸 茚三酮反应：蓝紫色 Lowry（福林-酚）法 Tyr + 福林酚试剂 蓝色深浅与含量存在线性关系 蓝色化合物 碱性条件 （钼蓝和钨蓝的混合物） 考马斯亮蓝显色法 考马斯亮蓝G－250与Pr结合后引起染料最大吸收光从465nm变为595nm 蛋白质－染料复合物有较高的消光系数，Pr最低检出量为1微克，灵敏度高 反应迅速，2min，且结合物在1h内稳定 干扰物质少 重要事件 1953年，Sanger F.首次完成牛胰岛素化学结构测定 （牛胰）核糖核酸酶A（Rnase A）是第一个测出一级结构的酶分子（Moore S.等 ，20世纪50年代) 酶纯化试验中通常先用(NH4)2SO4作为分级沉淀剂，再用Sephadex G-25凝胶柱层析法从沉淀酶液中除去(NH4)2SO4。请问： (1) 用(NH4)2SO4做沉淀剂有何优点? (2)如发现柱层析后酶的总活性较纯化前明显提高,可能的原因是什么? (3)柱层析时,湿法装柱的注意事项主要有哪些? 溶解度…受温度变化影响… 去杂效果…蛋白活性… 测得某一Pr样品氮含量为0.2克，此样品约含Pr多少克?A. 1.00克 B. 1.25克 C. 1.50克 D. 3.20克 E.6.25克 下列哪种氨基酸属于人体的营养非必需氨基酸? A．Phe B．Lys C．Tyr D．Leu E．Met Val Ile Leu Phe Met Trp Thr Lys (His、Arg) 借 一 两 本 淡 色 书 来 大多数蛋白质中的含氮量是( )。 A. 6% B. 16% C. 23% D. 10% 简答题 举出4种常用的Pr浓度测定方法，并比较其优缺点。 简述蛋白质的四级结构及其维持各级结构的键或力。 现有纯化的小牛胸腺DNA和牛血清白蛋白溶液各一瓶。请简要写出根据核酸与蛋白质紫外线吸收的特性区分上述两种物质的实验原理。（10分） Pr分子中存在Trp、Tyr与Phe等芳香族氨基酸残基 芳香族氨基酸残基中含有共轭双键 其最大吸收峰在280 nm 附近，而在此波长处DNA 分子没有吸收峰。 DNA 分子中含有嘌呤环和嘧啶环 其共轭双键系统在260 nm 波长处有最大吸收峰，而在此波长处蛋白质分子没有吸收峰 ——据此可将小牛胸腺DNA 和牛血清白蛋白区分 计算题 1．测得Pr分子中Trp残基占分子量的0.29%。 计算该Pr的最低分子量（注：Trp分子量为204Da）。 2．已知AA平均分子量为120Da。有一种多肽的分子量 是15120Da，如果此多肽完全以α －螺旋形式存在， 试计算此α －螺旋的长度和圈数。 解：Trp残基MW / Pr MW＝0.29% Pr MW＝64138Da Pauly试剂是将对氨基苯磺酸的重氮化合物喷洒于滤纸， 定性检测蛋白质的试剂，在蛋白质的地方显橘红色。 它的生色反应是发生在蛋白质内的（ ） A. 色氨酸的吲哚环 B. 半胱氨酸的巯基 C.组氨酸的α