5第五章PCR法获取目的基因分析.pptVIP

2.遗传病的诊断 基因缺失、插入或置换等 地中海贫血 珠蛋白链合成不平衡 * PCR法获取目的基因 * * PCR法获取目的基因 * A 正常人 病 人 正常 病人 PCR-RFLP法： 3.恶性肿瘤（癌基因或抑癌基因）的检测 限制性内切酶 Ras基因 * PCR法获取目的基因 * 突变 限制性内切酶 正常 突变 电泳 * PCR法获取目的基因 * * PCR法获取目的基因 * 4.基因鉴定 女性 男性 Y引物 PCR 男性 女性 六、PCR法克隆目的基因 1.T载体克隆PCR获取的目的基因 由Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物中，其3’末端总是会带有一个非模板依赖型的突出碱基，而且这个碱基几乎总是A，因为Taq DNA聚合酶对dATP具有优先聚合活性。由于该突出碱基的存在，克隆时可以使用T载体克隆目的基因。 * PCR法获取目的基因 * 具有3‘-5’ 外切酶活性的DNA 聚合酶（如pfu聚合酶），其扩增的PCR 产物是平末端, 要对这种平末端的PCR 产物进行克隆, 应首先对PCR产物的3‘末端进行加A的工作。工作程序如下。 * PCR法获取目的基因 * 方案一 胶回收平末端 PCR产物 加入5μl 10×Taq DNA Polymerase Buffer、4种dNTP或dATP、2.5U Taq DNA Polymerase 加水至终反应体积为