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虫生真菌粉棒束分子系统学研究
分类号 Q94 密级 公 开
UDC 编号
硕士研究生学位论文
题 目 虫生真菌粉棒束孢分子系统学研究
Study on olecular Systematics of an Entomogenous Fungus Isaria farinosa (Holmskiold) Fries
学院(所、中心) 生命科学学院
专业名称 植物学
研究生姓名 代永东 学号 1201000961 导师姓名 虞 泓 职称 教授
二零一三 年 五 月
daidiy1109@163.com 或 daidiy@
摘 要
粉棒束孢Isaria farinosa (Holm) Fries,又被称为虫花棒束孢,虫草棒束孢。粉棒束孢在生物防治、食品、医药和保健领域表现出巨大的潜在价值。然而,基础研究尚显薄弱,关于粉棒束孢系统学研究,现有资料零散不充分,也不全面,甚至观点相悖,导致这一物种系统分类出现混淆和模糊,开发应用也出现混乱。
本研究对粉棒束孢及相关种属进行分子系统学研究,主要获得以下结果:
通过对6株粉棒束孢和1株蝙蝠蛾拟青霉菌株培养和显微形态观察,确定粉棒束孢形态结构具多型特征,主要体现为瓶梗形态和着生方式以及孢子连结方式。而粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉二者形态显微结构存在重叠特征,不具有种特异性。
本研究对采自滇中、滇西、滇东等地的粉棒束孢共29菌株进行ITS测序,在全29条,长502bp的ITS序列中,共10个变异位点,相互间没有显著性差异。对GenBank中粉棒束孢ITS序列整理,共得到75条序列,其中6条长度仅300余bp,9条为错误鉴定;而另外60条与测序数据无差异。通过比对,还获得除上述60条以外与粉棒束孢高度相似36条序列,其中,18条标识为Paecilomyces sp.或Isaria sp.未给定完整种名的序列,18条标识为其他非粉棒束孢真菌,分别是3条蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali、3条球孢白僵菌 Beauveria bassiana、4条蛹虫草Cordyceps militaris、5条枚烟色棒束孢Isaria fumosorosea、2条鲜红棒束孢Isaria amoenerosea和1条Akanthomyces novoguineensis。经过序列特征分析,建议将这些序列全部视为粉棒束孢。对这125条进行聚类分析,获得4个分支,但遗传距离较小,分支间不具有明显的系统发育信息。
通过对粉棒束孢及相关种属共计80个物种144条ITS序列进行分析,确定棒束孢属具有3个分支,相互间为多系类群。粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉聚为一支,与其他棒束孢种被蚧霉菌、白僵菌、蛹虫草等隔开。同时,ITS区的RNA结构模拟表明ITS序列二级结构具保守性。对粉棒束孢等44物种共计63条序列进行3-5基因(18S rDNA、28S rDNA、tef-1α、rpb1和rpb2)系统学分析,结果发现棒束孢属物种形成3个分支,各类群的物种组成与ITS结果一致。粉棒束孢与蝙蝠蛾拟青霉无显著差异,聚为紧密一支,表明二者属于同一个系统学种。粉棒束孢与Cordyceps tuberculata (无性型为Akanthomyces aculeatus)和Cordyceps confragosa (无性型为Lecanicillium attenuatum)遗传距离较小,但它们无性型属于3个不同的属,表明无性型形态之间并不具有严格的系统发育关系。另外,多基因系统学支持将细束梗孢Akanthomyces和球束梗孢Gibellula分支纳入到狭义虫草属(Cordyceps s. s.)中,但支持率较低。
通过对350余条虫草类真菌18S rDNA分析,确定虫草类真菌18S rDNA I型内含子分布,为18S rRNA序列第560、1164、1210和1425位点。由此设计3对内含子特异性引物,实现虫草类真菌18S rDNA I型内含子定量检测。对5株粉棒束孢18S rDNA I型内含子进行测序,获得粉棒束孢18S rDNA位点1164和1425的 I型内含子,内含子序列分析显示在种间存在明显差异,但种内高度保守。因此,可以作为物种鉴定的辅助指标。
利用8条RAPD引物对26株粉棒束孢和3株蝙蝠蛾拟青霉进行扩增,获得条带清晰的电泳谱带。谱带统计和聚类分析发现,在UPGMA聚类中距离为0.75处,供试菌株可分为5个分支,表现出丰富的遗传信息;同时,蝙蝠蛾拟青霉分散在粉棒束孢分支中,不具有独特的分枝地位。RAPD分析支持将蝙
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