5-2011级酶工程实验》教案.docVIP

徐 州 工 程 学 院 教 案 2013 年至 2014 年 第 1 学期 第 周 星期 课题名称（含教材章节）： 《酶工程实验》 实验一 产纤维素酶菌株筛选和产酶条件优化分析 教学目的和要求： 1、熟悉功能性菌株筛选方法 2、掌握纤维素降解菌株的筛选方法 3、掌握菌株产酶条件优化方法 教学重点： 酶工程研究开发的策略 教学难点： 产酶条件优化方法 教 学 内 容 （ 要 点 ） 1、产纤维素酶菌株的筛选分析 2、菌株产酶条件优化 徐 州 工 程 学 院 教 案 纸 一、实验目的实验原理 1 酶的粗提； 2 酶的精制。 九 微生物产酶菌种的保藏 1 斜面； 2 沙土管； 3 冷冻。 普通冷冻保藏技术 -20℃ 超低温冷冻保藏技术 -60一-80℃ 液氮冷冻保藏技术 二 、纤维素酶研究情况 2.1 纤维素酶简介 2.1.1 纤维素 纤维素占植物干重的35%~50%，是地球上分布最广的碳水化合物。它无色、无味，呈白色丝状，不溶于水及一般的有机溶剂。纤维素分子是由葡萄糖苷通过β-1,4糖苷键连接起来的链状高分子，分子量50000~座机电话号码，相当于300~15000个葡萄糖基，不形成螺旋构象，没有分支结构，易形成晶体。 2.1.2 纤维素酶 纤维素酶是能将纤维素水解成还原糖的一类酶系的总称。目前普遍认为要完全降解纤维素，至少需要3种功能不同的酶协同作用。它们是 EG 内切葡聚糖酶 、CBH 外切葡聚糖酶 和 CB β-葡萄糖苷酶 。 2.2 纤维素酶的应用 2.2.1 在能源方面的应用 乙醇是一种可以通过糖发酵获得的可再生能源。在美国，乙醇已经被广泛地作为石油燃料的替代品。从上世纪80年代开始，用玉米生产的燃料乙醇就被作为酒精-汽油混合燃料或者氧化燃料来使用。这些混合燃料中乙醇的体积比例高达10%。使用乙醇混合燃料可以降低石油燃料的使用量，从而在一定程度上减少了温室气体的排放。然而使用玉米生产的乙醇燃料比石油燃料成本高，因为作为一种作物，玉米需要一定的培植时间和成本；同时，玉米本身是一种食物和饲料，大量地用于生产乙醇是不可行的，毕竟耕地资源有限。废弃纤维素原料比如农林废弃物、草、锯末和木片等是生产乙醇的潜在的而充足的可再生性资源。利用纤维素酶有效地将这些纤维素物质转化成葡萄糖等单糖，然后通过微生物发酵的方法将葡萄糖转化成乙醇，将为乙醇混合燃料的生产与应用打开一片新天地。 开发利用这一可再生资源的关键是纤维素物质的预处理以和如何使纤维素酶在水解过程中酶活性最大地发挥。预处理可以去除木质素和半纤维素，在一定程度上降低纤维素的结晶度并且增加纤维素物质的可接触面积。至于纤维素酶，为了满足竞争的需要，生产每加仑乙醇的纤维素酶的成本不能过高。这样就要求尽量降低纤维素酶系统的复杂度，只保留少量几种必须组分；更重要的是生产出能够更有效地水解预处理过的纤维素物质的重组型纤维素酶。 2.2.2 在其他方面的应用 纤维素酶已被广泛的应用于食品、酿造、农业、纺织、洗衣等多个领域中。 食品工业中利用纤维素酶处理植物性原料，可使植物细胞壁软化、崩溃，从而改变细胞壁的通透性，提高细胞内含物如蛋白质、糖等的释放与提取，便于加工。另外，在过去果实和蔬菜的加工过程中，软化植物组织的办法主要采用热烫或者酸碱处理，使得果蔬的香味和维生素大量损失，使产品的食用和营养价值下降。现在利用纤维素酶进行预处理就可以避免这些缺点。 酱油酿造主要利用蛋白酶、淀粉酶等酶类对原料进行酶解,若再使用纤维素酶, 使大豆等原料的细胞膜膨胀软化破坏, 使包藏在细胞中的蛋白质、碳水化合物释放, 这样就可以缩短酿造的时间、提高产率, 同时还提高品质, 使氨基酸还原糖含量增加。 在啤酒、葡萄酒的酿造过程中也使用到纤维素酶。在低质量大麦发芽的过程中加入纤维素酶可水解β-1,3和β-1,4葡聚糖从而帮助大麦发芽。纤维素酶还可以提高啤酒的过滤效率，并能增加葡萄酒的香味。 由于畜禽饲料中含有大量的纤维素，除某些反刍动物有分解纤维素的能力外，大部分畜禽没有此能力。纤维素酶能够分解复杂的纤维素，生成易消化物质葡萄糖，便于动物吸收。在饲料中添加了纤维素酶后，其提高家畜家禽生长性能、生产性能等效果显著。 纤维素酶已成为纺织和洗衣行业的第三大酶系。生物打磨和生物抛光是目前纤维素酶在纺织行业中的主要应用。纤维素酶也被用于家用洗涤剂中，因为它们可以增加去污能力，从织物表面去处小的碎纤维，增加织物表面的亮度和光泽。 2.2.3 纤维素酶应用中存在的问题 纤维素酶作为能够有效降解纤维素的酶类，无论在动物生产还是环境保护中都确实起到了一定的作用，有非常好的应用前景。但是纤维素酶在大规模工业化生产应用中很大程度上受到其活性和成本的限制。目前，对于纤维素酶的研究