白曲酸性蛋白分解力.docVIP

白曲酸性蛋白分解力100g绝干曲在一定的PH和40℃/h条件下分解蛋白质的克数为1蛋白质分解单位（P·U） 一、试剂与溶液 1、乳酸缓冲液（PH3.0），适用酸性蛋白酶。 甲液：称取乳酸（80—90%）10.6克，加水溶解定容1000毫升。 乙液：乳酸钠（70%）16克，加水定容1000毫升。 取甲液8毫升加乙液1毫升，稀释一倍,摇匀，即0.05摩尔/L乳酸缓冲液。 2、 干酪素。 3、 硫酸镁-硝酸溶液：4份硫酸镁饱和液加1份浓硝酸混合均匀。 4、 无二氧化碳的水：按GB/T 603配制。 5、 氢氧化钠标准溶液[c NaOH 0.1mol/L]：按GB/T 601配制。 6、 酚酞指示剂（10g/L）：按GB/T 603配制。 7、分析天平：感量0.1mg 水浴锅：20℃～100℃±1℃ 干燥箱：0℃～300℃ ±1℃ 容量瓶：100 mL ；1000 mL。 试管：ф15mm×100mm 移液管：1mL； 2mL；5mL。 刻度吸管：0.5mL；1mL；5ml；10mL。 二、分析步骤 1、 大曲样品制备:取成品曲1000g，粉碎成曲粉，混匀，备用。 2、 0.5%干酪素溶液的制备 称取干酪素0.5g（准确至0.0001g）放入烧杯中，加2—3滴浓乳酸湿润，加入适量缓冲溶液，沸水浴加热搅拌溶解，冷却，用缓冲溶液定容 100 mL，摇匀。若隔日使用，加甲苯少许，放入冰箱中保存，以防微生物滋长。冰箱储存有效期3天。 3、 5%样品溶液的制备 称取相当于绝干样品5g（称准至0.001g）的大曲粉，移入100ml容量瓶中摇匀，用缓冲溶液定溶至刻度，在40℃水浴中，间断搅拌1h,过滤，滤液备用。 4、测定 取试管10支，按顺序加贴1号～10号管号，依照下表各试管规定量，分别加入0.5%干酪素溶液、5%样品溶液和蒸馏水，混匀。 各试管同置于40℃水浴中，保温60分钟。 取出各试管，分别加入硫酸镁-硝酸溶液0.5 mL，混合均匀，放入试管架上静置1h，观察各试管以不生成沉淀者为蛋白质分解已完全的标志，即生成沉淀的试管前的一个没有生成沉淀的试管为蛋白质刚好完全分解的临界值管，记录临界值管中5%样品溶液的体积a。 例如：若8号管产生沉淀，其前面的7号管没有沉淀现象，那么7号管即为临界值管，若出现10支试管均无产生沉淀现象，则说明大曲蛋白分解力较强，可将5%样品溶液稀释10倍，重复上述操作，直至测出临界值管。蛋白质酶特强的大曲可用1%的干酪素溶液来测定蛋白分解力。 试 管 编 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0.5%干酪素（mL） 5 5 5 5 5 5 5 5 5 5%样品溶液（mL） 5 4 3 2 1 0.8 0.5 0.4 0.2 蒸馏水（mL） 0 1 2 3 4 4.2 4.5 4.6 4.8 总体积为10毫升。 大曲蛋白分解力的计算按式（6）计算： …………（6） 式中：P·U——蛋白分解力（g/100g.h）； m1——称取的干酪素的质量，单位为克（g）； V1——干酪素溶液定容后的体积，单位为毫升（mL）； m2——称取的曲粉的质量，单位为克（g）； V2——曲粉溶液定容后的体积，单位为毫升（mL）； V3——测定时比色管中吸取的干酪素溶液的体积，单位为毫升（mL）； V4——临界管中对应的大曲滤液的体积，单位为毫升（mL）。 取两次测定结果平均值报告，测定结果保留至。 同一条件下两次测定结果之差不得超过10%。